蛍光タンパク質での細胞可視化による、脊髄神経回路網の機能解析

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まず、VO部位で発現するそれぞれの遺伝子について、その陽性細胞でGFPを発現するトランスジェニックフィッシュを作製した。続いて、DsRedを発現するトランスジェニックフィッシュも作製した。GFPないし、DsRedは安定なタンパク質であるため、遺伝子の発現が終了しても、陽性細胞を後期まで追跡していくことが可能である。作製されるトランスジェニックフィッシュを用いて、解剖学的解析を進め、それぞれの遺伝子陽性細胞の移動様式、神経細胞としての形態を解析した。ついで、神経伝達物質特性を解析した。これは既に研究室で確立された、各神経伝達物質陽性細胞の可視化ラインと掛け合わせることで、簡便に検出することができた。また、Cre-loxPシステムを利用することによって、より、詳細に、神経細胞の観察が可能になった。Dbx陽性細胞においては、グルタミン酸作動性の神経とグリシン作動性の神経細胞が存在し、さらにグルタミン酸作動性の神経細胞には、過去にその存在の知られていたMCoD、UCoDが含まれていたことがわかった。これらの神経細胞がLocomotion時にどのような働きをしているのかは、調べられていなかったそこで、これらに関して電気生理学的な解析を行ったところ、魚の遊泳行動時に発火している事が明らかになった。おそらく、これらの神経は行動に関わる介在神経であることが示唆された。