哺乳類神経上皮細胞の新規培養システムの構築と神経発生に関わる分子装置の研究

新型哺乳动物神经上皮细胞培养体系的构建及神经发生相关分子器件的研究

• 批准号: 18700348
• 负责人: 小曽戸 陽一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700348/
• 关键词: 神経発生; 脳形成; 細胞培養; 細胞極性; 増殖と分化; 神経上皮細胞; 神経前駆細胞; コラーゲン培養; 神経再生; 非対称分裂

胎生期脳の神経細胞の前駆細胞である神経上皮細胞を解析する際に、生体内では様々な細胞種が混在する。神経上皮細胞からの神経発生に影響を与える主な因子として、細胞間のシグナル伝達、また細胞がおかれる空間的配置が重要であることが考えられるが、この両者の働きをin vivoの実験系で明確に分離することは困難であり、そのうち一方を独立にコントロールできるin vitroの実験系が不可欠である。この目的のため、本研究では神経上皮細胞の運命決定に重要なapical-basalの上皮極性が保たれる管状の培養系を新規に構築することが目的とされた。申請者は、均一系を用いて細胞本来の性質を観察するために、新規培養系の確立を行った。神経発生が起こりつつあるマウスの10.5日胚の頭部から神経上皮細胞を調製し、コラーゲン培地中にて包埋培養する。次にコラーゲン中で培養されている組織塊を分離し、神経管の空間を反映した単層の閉じた培養系となる、内側表面を細胞外基質にてコートしたチューブ内に導入した。培養後、神経上皮細胞、神経細胞を含む組織に対し、増殖、細胞分裂、神経細胞、アポトーシス、apical膜、basal膜を示すマーカーを用いた免疫染色を行うことで、この培養系がin vivoの神経細胞生成を反映しているかを評価した。この結果、本培養法では神経上皮細胞の上皮極性が正常に保たれること、さらに細胞分裂、神経細胞への分化も観察された。この研究により、神経上皮細胞の増殖・分化を培養系において観察する新規手法の確立が行われた。

During the prenatal period, the cells in the forebrain of the brain are analyzed by the neuroepithelial cells, and the cells in the body are mixed. The main factors affecting the development of neuroepithelial cells are the intercellular relationship and the spatial arrangement of cells. The objective of this study is to establish a new method for the maintenance of apical-basal epithelial cell cultures, which is important in determining the fate of neuroepithelial cells. The applicant shall examine the nature of the cells in the uniform culture system and establish the new culture system. Neurogenesis begins at 10.5 days old and neuroepithelial cells are cultured in culture. The tissue mass in the culture medium is separated, and the space of the nerve tube is reflected in the closed culture system, and the extracellular matrix is introduced in the inner surface. After culture, neuroepithelial cells, neurocytes, including tissue, proliferation, cell division, neurocytes, apical membrane, basal membrane, immunostaining, and evaluation of neurogenesis in vivo As a result, this culture method can maintain normal epithelial polarity, cell division and differentiation of neuroepithelial cells. This study was conducted to investigate the proliferation and differentiation of neuroepithelial cells and establish new methods.