新規シアル酸含有糖ペプチドの抽出法の確立

含唾液酸糖肽提取新方法的建立

• 批准号: 18710178
• 负责人: 黒河内 政樹
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710178/
• 关键词: シアル酸糖鎖抽出; 選択的酸化; アミノオキシ担体; 糖ペプチド; 質量分析計; アミノ酸配列分析; 糖鎖構造解析; 糖タンパク質

本年度は、シアル酸含有糖ペプチドの調整並びに混合物の試料を用いてシアル酸糖ペプチドの解析を行った。1)単一糖タンパク質(AFP, Firinogen, EPO)由来のシアル酸含有糖ペプチドの効率的捕捉と切断(遊離)。糖タンパク質のトリプシン消化物を1mM過ヨウ素酸ナトリウム溶液を用いて氷冷下で15分間酸化した。次に、反応液をポリアクリル酸型のアミノオキシ担持樹脂を用いて、シアル酸含有糖ペプチドのみを選択的に単離収集した。捕捉した糖ペプチドは、3%TFA溶液を用いてシアル酸部位で切断を行い、糖ペプチドを回収し、MALDI TOF-MSによる解析を行った。3)血清中のシアル酸含有糖ペプチドの選択的捕捉と切断(遊離)。マウス疾患モデルマウスの血清試料のトリプシン消化物を1mM過ヨウ素酸ナトリウム溶液を用いて氷冷下で15分間酸化した。次に、反応液をポリアクリル酸型のアミノオキシ担持樹脂を用いて、シアル酸含有糖ペプチドのみを選択的に単離し回収した。捕捉した糖ペプチドは、3% TFA溶液を用いてシアル酸部位で切断を行い、糖ペプチドを回収し、MALDI TOF-MSによる解析を行った。本プロジェクトにおいて得られた成果は、Angew. Chem. Int. Ed (2007)に発表させて頂きました。本法は、非還元末端にシアル酸を有する複合糖質の網羅的なエンリッチが可能であり、かつペプチドおよび糖鎖の配列を同時かつ大規模に取得可能な唯一の方法論であることから、グライコプロテオミクスにおける基盤技術になることが期待される。

This year, the adjustment and analysis of sugar content of citric acid were carried out. 1) Single sugar compounds (AFP, Firinogen, EPO) are derived from the capture and cleavage (free) of sugar compounds containing sugars. The sugar extract was acidified in 15 minutes at room temperature with a 1mM sucrose extract solution. In addition, the reaction solution is divided into three groups: acid type, carrier resin, carrier resin, carrier resin and carrier resin. Capture sugar, 3% TFA solution, cut off sugar, recovery, MALDI TOF-MS analysis 3)The serum contains a variety of sugar molecules, which are selectively captured and cut off (free). The serum sample was acidified in 15 minutes at 1mM pH with a cold solution. In addition, the reaction solution is used to support the resin, and the sugar containing resin is used to support the resin. Capture sugar, 3% TFA solution, cut off sugar, recovery, MALDI TOF-MS analysis This is the first time I've ever seen an angel. Chem. Int. Ed (2007). This method is based on a unique methodology for obtaining a possible array of complex carbohydrates at the end of a non-reducing molecule and for the alignment of sugar chains on a large scale.

项目成果

Construction and structural characterization of versatile lactosaminoglycan-related compound library for the synthesis of complex glycopeptides and phingoglycolipids

用于合成复杂糖肽和鞘糖脂的多功能乳糖胺聚糖相关化合物库的构建和结构表征

• 发表时间: 2006
• 期刊: The Journal of Organic Chemistry 71
• 作者: 阿部貴志;池村淑道;木ノ内誠;中村由紀子;前野聖;金谷重彦;栗田 奈津子;Fujimura T.;Miura Y.;Matsuhashi T.;Furukawa J-I.;Kurogochi M.;Itoh N.;Kitatsuji C.;Shimaoka H.;Shimawaki K.;Matsushita Takahiko;Hato Megumi;Naruchi Kentarou
• 通讯作者: Naruchi Kentarou

Reverse glycoblotting allows rapid-enrichment glycoproteomics of biopharmaceuticals and disease-related biomarkers

• DOI: 10.1002/anie.200702919
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION
• 影响因子: 16.6
• 作者: Kurogochi, Masaki;Amano, Maho;Nishimura, Shin-ichiro
• 通讯作者: Nishimura, Shin-ichiro

A comprehensive approach to structural and functional glycomics based on chemoselective glycoblotting and sequential tag conversion

基于化学选择性糖印迹和顺序标签转换的结构和功能糖组学综合方法

• 发表时间: 2008
• 期刊: Anal. Chem. 4
• 作者: Furukawa;J-i.
• 通讯作者: J-i.

Unusual N-glycan structures in a-mannosidase II/IIx double null embryos, identified by a systematic glycomic approach based on 2D-LC mapping and MDSF method in MALDI-TOF/TOF mass spectrometry

α-甘露糖苷酶 II/IIx 双无效胚胎中异常的 N-聚糖结构，通过基于 2D-LC 作图和 MALDI-TOF/TOF 质谱中 MDSF 方法的系统糖组学方法进行鉴定

• 发表时间: 2006
• 期刊: Molecular ＆ Cellular Proteomics 5
• 作者: 阿部貴志;池村淑道;木ノ内誠;中村由紀子;前野聖;金谷重彦;栗田 奈津子;Fujimura T.;Miura Y.;Matsuhashi T.;Furukawa J-I.;Kurogochi M.;Itoh N.;Kitatsuji C.;Shimaoka H.;Shimawaki K.;Matsushita Takahiko;Hato Megumi
• 通讯作者: Hato Megumi

One-pot solid-phase glycoblotting and probing by transoximization for high-throughput glycomics and glycoproteomics.

• DOI: 10.1002/chem.200601613
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: Chemistry
• 作者: Hideyuki Shimaoka;Hiromitsu Kuramoto;J. Furukawa;Y. Miura;Masaki Kurogochi;Y. Kita;H. Hinou;Y. Shinohara;S. Nishimura