Entwicklung von Methoden zum Nachweis von Punktmutationen und Polymorphismen basierend auf hochselektiver enzymatischer DNA-Synthese mittels chemisch modifizierter Oligonucleotide

开发基于使用化学修饰寡核苷酸的高选择性酶促 DNA 合成的点突变和多态性检测方法

• 批准号: 5359278
• 负责人: Professor Dr. Andreas Marx
• 金额: --
• 依托单位: Arbeitsgruppe Organische Chemie / Zelluläre Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5359278?language=en
• 关键词: Entwicklung; von; Methoden; zum; Nachweis

Ziel des Projekts ist die Entwicklung neuer Methoden zum Nachweis bekannter Nucleotid-Variationen in Genen wie Punktmutationen oder Polymorphismen. Die zu entwickelnde Methode basiert auf dem Prinzip der Primer-Verlängerung durch DNA-Polymerasen. In Vorarbeiten konnten wir bereits zeigen, das die Verwendung 4'-C-alkylierter Oligonucleotide an Stelle unmodifizierter Oligonucleotide zu einer signifikant erhöhten Diskriminierung zwischen der Verlängerung von kanonischen zu nicht-kanonischen DNA-Substraten führt. Diese Eigenschaft der modifizierten DNASubstrate, die mit bekannten Methoden nicht erzielt werden kann, wollen wir in dem vorliegenden Projekt zum Nachweis von Nucleotid-Variationen durch die DNA-Polymerase-Reaktionen ausnutzen. Dazu werden wir weitere modifizierte Nucleotide entwerfen, synthetisieren, in Primerstränge einbauen und ihre Eigenschaften in der DNA-Polymerase-katalysierten DNA-Synthese untersuchen. Basierend auf den aus diesen Studien gewonnenen Erkenntnissen sollen neue routinefähige und prinzpiell automatisierbare Methoden zum Nachweis von Nucleotid-Variationen wie Punktmutationen oder Polymorphismen in Genen entwickelt werden.

本课题是研究基因组中核苷酸变异的新方法，即点突变或多态性。该方法基于DNA-聚合物引物扩增原理。在第四章中，我们将讨论4 '-C-alkylerOligonucleotide和未修饰的Oligonucleotide之间的相互作用，以确定是否存在与DNA底物无关的DNA底物。这种修饰DNA底物的特性，用这种方法是不可能韦尔登的，我们将在DNA聚合酶反应的核苷酸变异研究中进行进一步的研究。我们韦尔登在DNA聚合酶催化DNA合成的基础上进行了核苷酸的修饰、合成和特征分析。基于这种方法，我们可以找到一种新的自动化方法，这种方法主要是在基因组中进行核苷酸变异，如点突变或多态性。