Energetik- und Calcium-Regulation bei stimulierter Exocytose in Paramecium-Zellen

草履虫细胞刺激胞吐过程中的能量和钙调节

• 批准号: 5360036
• 负责人: Professor Dr. Helmut Plattner
• 金额: --
• 依托单位: Fachbereich Biologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5360036?language=en
• 关键词: Energetik; und; Calcium; Regulation; bei

In Paramecium-Zellen wird die getriggerte, synchrone (0.1 sec) Exocytose begleitet von einem dramatischen ATP-Verbrauch und der Dephosphorylierung eines Phosphoprotein von 63kDa, PP63/Parafusin (pf), und zwar strikt im Ausmass der stattfindenden Exocytose von "dense core"-Vesikeln ("Trichocysten"). Dieses wird gefolgt von langsamer (30 sec) Rephosphorylierung und Füllung des ATP-Pools. Obwohl PP63/pf in exo- Stämmen gleich vorhanden ist, wird PP63/pf nur in exocytosefähigen exo+ Stämmen dephosphoryliert, bei zeitlich versetzter Doppeltriggerung strikt im Ausmass der Assemblierung von Dock-/Fusionstellen bzw. der Trichocysten-Exocytose. Dabei setzen wir auf Grund von "Knock-out"-Experimenten an Tetrahymena voraus, dass die PP63 Dephosphorylierung nichts mit Membranfusion zutun hat, sondern nur "downstream"-Effekte bewirken kann. Unsere Klonierungsarbeiten zeigten, dass PP63/pf identisch ist mit Phosphoglukomutase (PGM) und auch nach heterologer Expression PGM Aktivität hat. Die funktionelle Bedeutung der De-/Re-Phosphorylierung von PP63/pf/PGM in strikter Koppelung mit dem Exocytoseablauf bleibt aufzuklären. Trotz der ubiquitären Verbreitung von PP63/pf bietet sich unser System in besonderem Masse zu Analyse an: Wegen seiner strikten Synchronizität (De- und Re-Phopsphorylierung können ohne Überlagerung analysiert werden), der Möglichkeit einer räumlichen (Immunmethoden) und zeitlichen (Quenched-flow) Zuordnung, der Isolierbarkeit der relevanten Komponenenten und der Möglichkeit funktioneller Tests in vitro und in vivo unter Einschluss von "Gene silencing" und Überexpression. Unsere Arbeiten zielen u.a. auf Mikrodomänen-Regulation energetischer Prozesse des Exocytoseablaufes.

在草履虫中，同步（0.1秒）外泌胞质产生一个戏剧性的ATP-Verbrauch和一个磷酸化蛋白63 kDa，PP 63/副核蛋白（pf）的去磷酸化，并在Ausmass中产生一个统计上发现的外泌胞质“致密核心”-Vesikeln（“毛孢”）。这将导致长时间（30秒）ATP酶的再磷酸化和浓缩。观察到PP 63/pf在exo- Stämmen中易于操作，但PP 63/pf仅在exo+ Stämmen脱磷中进行，在Dock-/Fusionstellen bzw组装的Ausmass中进行了多次重复。毛囊藻-外胞藻。本实验采用四膜虫进行敲除实验，发现PP 63的去磷酸化作用不受膜融合的影响，只是下游效应。我们的克隆研究表明，PP 63/pf鉴定是通过磷酸葡萄糖变位酶（PGM）和异源表达的PGM激活来进行的。PP 63/pf/PGM的脱/再磷酸化作用与细胞外基质的结合有关。Trotz der ubiquitären Verbreitung von PP63/pf bietet sich unser System in besonderem Masse zu Analyse an：Wegen seiner罢工同步（De- und Re-Phopsphorylierung können ohne Überlagerung analysiert韦尔登），der Möglichkeit einer räumlichen（免疫方法）和时间（淬火流）Zuordnung，基因沉默的体外和体内相关成分和功能的隔离试验和超表达。Unsere Arbeiten zielen u.a. auf Mikrodomänen-Regulation energetischer Prozesse des Exocytoseblaufes.