Cryotrapped reaction intermediates in cytochrome P450 and kineticsanalyses by newly developed rapid-freeze-quench EPR spectroscopy

细胞色素 P450 中的冷冻捕获反应中间体以及通过新开发的快速冷冻淬灭 EPR 光谱进行动力学分析

• 批准号: 19550165
• 负责人: HORI Hiroshi
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19550165/
• 关键词: 生物無機化学; シトクロムP450cam; 一原子酸素添加反応; 反応中間体; 急速混合凍結装置; 電子スピン共鳴; EPR; プチダレドキシン; シトクロームP450cam; 過酸; ポルフィリンπカチオンラジカル

サブミリ秒領域で酵素反応の進行を停止させ、捕捉した反応中間体を電子スピン共鳴法で検出・同定するため、再現性の良い急速混合凍結システムを開発した(不感時間 0.2 ms)。酸化型シトクロムP450camと過酢酸の反応でポルフィリンπカチオンラジカル中間体分子種の捕捉・同定に成功した。還元型P450cam・電子供与体複合体と酸素分子との急速混合凍結実験で還元型ヘム鉄に結合している酸素分子が1電子還元されたペルオキシド型反応中間体分子種の捕捉に初めて成功した

The enzyme reaction process in the field was stopped, captured, and the reaction intermediate was detected by electron resonance method. The rapid mixing and freezing process was started with good reproducibility (non-sensing time 0.2 ms). The capture and identification of molecular species of acidified P450cam peracetic acid P450cam·electron donor complex and acid molecule rapid mixing and freezing process of P450cam·electron donor complex and acid molecule rapid mixing process of P450 cam·

项目成果

金属タンパク質の電子常磁性共鳴(EPR)測定をしようとする人のために

对于那些尝试使用电子顺磁共振 (EPR) 测量金属蛋白的人

• 发表时间: 2008
• 期刊: 蛋白質科学会アーカイブ(Web公開誌) 1#037
• 作者: 堀洋

急速混合凍結EPR法によるP450cam反応サイクルにおける新しい反応中間体の観測

利用快速混合冷冻EPR法观察P450cam反应循环中新的反应中间体

• 发表时间: 2007
• 作者: D. Sugiyama;Y. Hirakawa;S. Osada;I. Fujita;Y. Hamasaki;and H. Kodama;堀洋
• 通讯作者: 堀洋