Study of the recognition of LPS by TLR4-MD-2 complex and the mechanism of TLR4 dimerization

TLR4-MD-2复合物对LPS的识别及TLR4二聚化机制的研究

• 批准号: 19770135
• 负责人: YAMAJI Nahoko
• 金额: $ 2.47万
• 依托单位: Suntory Institute for Bioorganic Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19770135/
• 关键词: 生体膜; 受容体; チャンネル; 免疫学; 生物物理; 蛋白質; 分子認識

MD-2-lipidA複合体の構造解析を行うため、MD-2の大腸菌発現系の構築を行った。結果、MD-2は不溶性画分に得られたため、変性剤存在下での精製、リフォールディングを試みたが変性剤の除去によりMD-2は沈殿し、精製は困難であった。そこで、コールドショック発現誘導とシャペロンとの共発現により、MD-2を可溶化した状態で発現することに成功した。

为了对MD-2-Lipida复合物进行结构分析，构建了MD-2的大肠杆菌表达系统。结果，在不溶性的部分中获得了MD-2，并在有贬值剂的情况下尝试了纯化和重新折叠，但是MD-2通过去除变性剂而沉淀，从而使纯化变得困难。因此，通过诱导冷休克表达和与伴侣的共表达，MD-2在溶解状态下成功表达。