酵素切断部位をもつ新規ハプテン-ペプチド付加体を活用した高親和力変異抗体の創製

使用具有酶切位点的新型半抗原-肽加合物创建高亲和力突变抗体

• 批准号: 19790399
• 负责人: 加藤 芳徳
• 金额: $ 2.42万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790399/
• 关键词: ハプテン; エストラジオール; 高親和力; 抗体

本年度は高親和力抗体の回収を可能とするペプチド修飾ハプテンの作製に従事した.まずペプチドについて,トリプシン切断配列とHis6タグおよびその間に数残基のアミノ酸をスペーサーとして組み入れたペプチド(23アミノ酸:N-GGSGGIEGRGAHGGSGGHHHHHH-C)を合成した.合成したペプチドについて,高速液体クロマトグラフィーにより精製した.次にエストラジオール(E_2)の7位カルボキシエチルチオ誘導体(E_2-7CET-NHS)とペプチドを反応させ,ペプチドのN末端にE_2を結合させた.反応生成物を高速液体クロマトグラフィーにより精製し,質量分析計により目的とするペプチド修飾E_2が作製されていることを確認した.作製したペプチド修飾E_2のトリプシン存在下および非存在下における抗E_2抗体との反応性について,抗His6タグ抗体固定化プレートを用いて確認した.その結果,トリプシン非存在下で抗原量に依存したシグナルの増大が認められた.また,トリプシン処理によりこのシグナルが消失したことから,作製したペプチド修飾E_2が意図したとおりの生化学的特性を有していることを確認した.

This year's high affinity antibody recovery is likely to be a problem for the production of high affinity antibodies. In addition to the above, the synthesis of the amino acid sequence (23 amino acid: N-GGSGGIEGRGAHGGSGGHHHH-C) was also carried out. Synthesis of high-speed liquid, high-speed liquid. The 7-bit CCE (E_2-7CET-NHS) in the second part of the study was combined with E_2 at the end of the study. The reaction product is high speed liquid, and the quality of the product is high. In the presence or absence of E_2, anti-E_2 antibody and anti-His 6 antibody were immobilized and confirmed. As a result, the amount of antigen depends on the presence of the antigen. To confirm the biochemical properties of E_2, we must make sure that E_2 has the same properties as E_2.

项目成果

Cleavableビオチン標識ハプテンを活用する高親和力抗コルチゾール変異抗体創製の試み

尝试使用可裂解的生物素标记的半抗原创建高亲和力的抗皮质醇突变抗体

• 发表时间: 2007
• 作者: 神田龍明;大山浩之;加藤芳徳;小林典裕;後藤順一
• 通讯作者: 後藤順一

高感度イムノメトリックアッセイに適する一本鎖Fvフラグメントー酵素融合タンパク質調製の試み

尝试制备适用于高灵敏免疫测定的单链Fv片段-酶融合蛋白

• 发表时间: 2007
• 作者: 神田龍明;大山浩之;加藤芳徳;小林典裕;後藤順一;加藤 芳徳
• 通讯作者: 加藤 芳徳

低分子化抗体フラグメント-バイオメディカル分析化学における新しい分子認識単位-

最小化抗体片段 - 生物医学分析化学中的新分子识别单元 -

• 发表时间: 2007
• 期刊: 臨床化学 36
• 作者: 小林典裕;加藤芳徳;大山浩之;後藤順一
• 通讯作者: 後藤順一

CDR shufflingを活用する高親和力変異抗エストラジオール抗体フラグメントの探索

利用 CDR 改组探索高亲和力突变型抗雌二醇抗体片段

• 发表时间: 2007
• 作者: 加藤芳徳;大山浩之;小林典裕;後藤順一
• 通讯作者: 後藤順一

高感度イムノメトリックアッセイの開発を目的とする変異型抗エストラジオール単一ドメイン抗体の探索

寻找突变型抗雌二醇单域抗体以开发高灵敏度的免疫测定法

• 发表时间: 2007
• 作者: 神田龍明;大山浩之;加藤芳徳;小林典裕;後藤順一;加藤 芳徳;大山 浩之
• 通讯作者: 大山 浩之