マイワシの卵形成を制御する分子・生理機構の基盤構築と再生産研究への展開

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昨年度の遺伝子発現解析により、マイワシが持つ8タイプの17β-水酸基脱水素酵素（17β-HSD）のうち、type 3、type 12a、type 12bが卵巣で高発現していて、卵巣発達に伴って発現が増加することが分かった。そこで本年度は、これら3タイプをエストラジオール-17β（E2）の合成に関与する17β-HSDの候補として選定し、in vitroでの基質特異性を解析した。まず、各遺伝子を単離してpCAGGSベクターに組み込み、哺乳類細胞用の発現ベクターを作製した。哺乳類細胞のHEK293T細胞に形質転換して、各酵素の組換え体を発現させた。それぞれの培養細胞に、アンドロステンジオン（AD）またはエストロン（E1）を添加して培養後、培養液を回収した。ADを添加したものは培養液中のテストステロン（T）量を、E1を添加したものは培養液中のE2量を定量した。その結果、type 12aとtype 12bは、19%の変換率でADをTに、50%の変換率でE1をE2に変換した。一方、type 3はどちらの触媒作用も示さなかった。さらに本年度は、生殖腺刺激ホルモン（GtH）によりtype 3、type 12a、type 12bの遺伝子（hsd17b3、hsd17b12a、hsd17b12b）が発現制御を受けるかどうかを調べた。卵黄形成を完了したマイワシ卵巣を培養して、GtHを含む下垂体抽出物を加えて培養後、卵巣をRNA laterで固定した。卵巣からRNAを抽出してcDNAを合成し、定量PCRにより各遺伝子発現量を定量した。その結果、下垂体抽出物を加えていないコントロールと比べて、いずれも遺伝子発現量に差はなかった。