マイワシの卵形成を制御する分子・生理機構の基盤構築と再生産研究への展開

为控制沙丁鱼卵子发生的分子和生理机制奠定基础并开展生殖研究

• 批准号: 21K05741
• 负责人: 入路 光雄
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Fisheries Research and Education Agency
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05741/
• 关键词: マイワシ; 卵形成; 17β-水酸基脱水素酵素; エストラジオール-17β; 再生産能力; 水産資源; 再生産; 生殖生理; ステロイドホルモン

昨年度の遺伝子発現解析により、マイワシが持つ8タイプの17β-水酸基脱水素酵素（17β-HSD）のうち、type 3、type 12a、type 12bが卵巣で高発現していて、卵巣発達に伴って発現が増加することが分かった。そこで本年度は、これら3タイプをエストラジオール-17β（E2）の合成に関与する17β-HSDの候補として選定し、in vitroでの基質特異性を解析した。まず、各遺伝子を単離してpCAGGSベクターに組み込み、哺乳類細胞用の発現ベクターを作製した。哺乳類細胞のHEK293T細胞に形質転換して、各酵素の組換え体を発現させた。それぞれの培養細胞に、アンドロステンジオン（AD）またはエストロン（E1）を添加して培養後、培養液を回収した。ADを添加したものは培養液中のテストステロン（T）量を、E1を添加したものは培養液中のE2量を定量した。その結果、type 12aとtype 12bは、19%の変換率でADをTに、50%の変換率でE1をE2に変換した。一方、type 3はどちらの触媒作用も示さなかった。さらに本年度は、生殖腺刺激ホルモン（GtH）によりtype 3、type 12a、type 12bの遺伝子（hsd17b3、hsd17b12a、hsd17b12b）が発現制御を受けるかどうかを調べた。卵黄形成を完了したマイワシ卵巣を培養して、GtHを含む下垂体抽出物を加えて培養後、卵巣をRNA laterで固定した。卵巣からRNAを抽出してcDNAを合成し、定量PCRにより各遺伝子発現量を定量した。その結果、下垂体抽出物を加えていないコントロールと比べて、いずれも遺伝子発現量に差はなかった。

Son yesterday annual の heritage 伝 発 now parse に よ り, マ イ ワ シ が hold つ 8 タ イ プ の 17 beta acid water base dehydrated vegetable enzyme (17 beta HSD) の う ち, type 3 and type a and type b 12 12 が eggs 巣 で high 発 now し て い て, egg 巣 発 da に with っ て 発 now が raised す る こ と が points か っ た. そ こ で は this year, こ れ ら 3 タ イ プ を エ ス ト ラ ジ オ ー ル - 17 beta (E2) の synthetic に masato and す る 17 beta HSD の alternate と し て し, selected the in vitro で の substrate specificity を parsing し た. ま ず, all survived 伝 を 単 from し て pCAGGS ベ ク タ ー に group み 込 み, mammalian cells with の 発 now ベ ク タ ー を cropping し た. Mammalian cells <s:1> HEK293T cells に morphoplasmic 転 exchange for <s:1> て, and various enzyme microtome exchange for え body を occurrence させた. そ れ ぞ れ の culture cell に, ア ン ド ロ ス テ ン ジ オ ン (AD) ま た は エ ス ト ロ ン (E1) を add し て を back after training, the culture medium 収 し た. AD を add し た も の は medium, の テ ス ト ス テ ロ ン (T) を, E1 を add し た も の は medium, の E2 quantity を quantitative し た. そ の results, type 12 a と type 12 b は, 19% の で AD を T に variations change rate, 50% の variations in rate で E1 を E2 に variations in し た. One side, type 3 ちら ちら <s:1> catalyst action さな さな さな った った. さ ら に は this year, gonad stimulation ホ ル モ ン (GtH) に よ り type 3, type a and type b 12 12 の heritage 伝 child (hsd17b3 hsd17b12a hsd17b12b) が 発 now suppression を by け る か ど う か を adjustable べ た. Vitellogenesis を finished し た マ イ ワ シ eggs 巣 を cultivate し て, GtH を containing む pituitary extract を plus え て after training, the eggs 巣 を RNA later で fixed し た. The <s:1> らRNAを of the oocyte is used to extract the <s:1> てcDNAを for the synthesis of <s:1> and quantitative PCRによ を. The amount of each residual 伝 is を for the quantification of <s:1> た. そ の result, pituitary extract を plus え て い な い コ ン ト ロ ー ル と than べ て, い ず れ も heritage 伝 son 発 now poor quantity に は な か っ た.

项目成果

マイワシの卵形成においてE2合成に作用する17β-HSDの同定

鉴定影响沙丁鱼卵子发生中 E2 合成的 17β-HSD

• 发表时间: 2023
• 作者: Nakade,M;Rafiuddin,M.A;Kobayashi,H;Kobayshi,S;Sakai,K;Inada.K;Shigematsu,K;Nagami,A;Ogiso,s;Toyota,K;Tabuchi,Y;Furusawa,Y;Hirayama,J;Harumi;T;Suzuki,N;Matsubara,H;入路光雄・米田道夫・風藤行紀・ 本郷悠貴
• 通讯作者: 入路光雄・米田道夫・風藤行紀・ 本郷悠貴