EMF特異的ヘモグロビンレセプターから迫る転写翻訳制御機構解明と寄生適応基盤

阐明 EMF 特异性血红蛋白受体的转录和翻译控制机制以及寄生适应的基础

• 批准号: 16H05025
• 负责人: 井上 昇
• 金额: $ 10.9万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16H05025/
• 关键词: 寄生虫; トリパノソーマ; ヘモグロビンレセプター; 発育時期特異性; 伝播阻止ワクチン

トリパノソーマはヘムの生合成経路を欠損し，生存に必要なヘムは宿主からの取込みに依存している。そのためヘム源を取込むタンパク質はトリパノソーマ制御法の標的として有効であると考えられる。本研究課題でトリパノソーマの媒介節足動物体内ステージ原虫(EMF)で発現・機能する遊離型ヘモグロビンレセプター(TcEpHbR)を同定し，海外学術雑誌にて報告した(Yamasaki et al., Parasites & Vectors, 2016)。TcEpHbRの伝播阻止ワクチン標的としての可能性を検討するため，TcEpHbRに対するモノクローナル抗体(mAb)を作製し，EMFに対する増殖阻害効果の解析及びmAbの性状解析を行った。TcEpHbRに対するmAbを作製し，EMFに対する反応性を間接蛍光抗体法(IFA)で確認した。またELISAでmAbのエピトープ探索を試みた。さらにmAb添加培養実験により，EMFに対する増殖阻害効果及びヘモグロビン(Hb)取込み阻害効果を解析した。IFAの結果，EMFに対して反応性のあるmAbが1クローン(mAb-1)得られた。ELISAの結果，mAb-1は150アミノ酸残基(AA)以下の組換えTcEpHbRには反応しなかったが，200AAから完全長の組換えTcEpHbRには反応した。またmAb-1処置はEMFの細胞膨張を特徴とする細胞変性と増殖阻害効果を引き起こしたが、EMFのHb取込みは阻害しなかった。ELISAの結果，mAb-1は立体構造認識抗体であることが明らかとなり、エピトープはTcEpHbRのN末端から50から200AAの領域に存在することが示唆された。また，mAb-1はEMFのHb取込みを阻害しなかったが，顕著なEMF増殖阻害効果を示した。このことからTcEpHbRはHbの取込みに加えて細胞増殖に関わる未知の機能を有する可能性が考えられた。

The host system is not fully functional, and the host system is dependent on the host system. The source of the problem is the quality of the problem. This research topic identifies the development and function of free form protozoa (TcEpHbR) in vector arthropods (EMF) and reports in overseas academic journals (Yamasaki et al., Parasites & Vectors, 2016)。To investigate the possibility of TcEpHbR's propagation inhibition of the target, to control TcEpHbR's propagation inhibition of the target antibody (mAb), to analyze EMF's propagation inhibition effect and to analyze mAb's properties. TcHbR mAb assay was used to determine the anti-inflammatory properties of the tumor cells. The mAb was detected by ELISA. In addition, mAb was added to the culture medium to analyze the growth inhibition effect of EMF and the growth inhibition effect of Hb. IFA results in the presence of anti-inflammatory mAb 1. ELISA results showed that mAb-1 had 150 amino acid residues (AA) and 200AA complete amino acid residues (AA). mAb-1 treatment EMF cell expansion characteristics, cell proliferation resistance, EMF resistance The results of ELISA showed that mAb-1 stereostructure recognized the presence of antibodies in the N-terminal region of TcEpHbR at 200AA. mAb-1 is a powerful EMF inhibitor, and it shows the effects of EMF amplification. The possibility of unknown functions associated with Hb selection is examined.

项目成果

Trypanosoma congolense EMF原虫に細胞変性を引き起こす抗TcEpHbR抗体の性状解析

导致刚果锥虫 EMF 寄生虫细胞变性的抗 TcEpHbR 抗体的表征

• 发表时间: 2016
• 作者: 山崎詩乃;菅沼啓輔;横山直明;河津信一郎;井上昇
• 通讯作者: 井上昇

A PCR based survey of animal African trypanosomes and selected piroplasm parasites of cattle and goats in Zambia

基于 PCR 的动物非洲锥虫和赞比亚牛和山羊选定梨形虫寄生虫的调查

• 发表时间: 2016
• 作者: Musinguzi;S.P.;Suganuma;K.;Asada;M.;Laohasinnarong;D.;Thillaiampalam;S.;Yokoyama;N.;Namangala;B.;Sugimoto;C.;Suzuki;Y.;Xuan;X.;Inoue;N.
• 通讯作者: N.