β2-ミクログロブリンアミロイド線維による細胞傷害機構、及び細胞刺激作用の解析

β2-微球蛋白淀粉样原纤维的细胞毒性机制和细胞刺激作用分析

• 批准号: 17K08759
• 负责人: 大越 忠和
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K08759/
• 关键词: アミロイドーシス; 細胞傷害; 実験病理学

本研究では、試験管内で形成したアミロイド線維と培養細胞を用い、透析アミロイドーシスにおいてβ2-ミクログロブリン（β2-m）アミロイド線維の沈着が破壊性脊椎関節症や骨嚢胞などの骨・関節破壊を引き起こすメカニズムを明らかにし、透析アミロイドーシスの予防、治療法開発の端緒を開くことを目的とした。具体的には、①β2-mアミロイド線維による滑膜細胞死の分子機構の解明、②β2-mアミロイド線維の滑膜細胞に対する刺激・活性化作用の解析、③β2-mアミロイド線維の軟骨細胞に対する細胞毒性の解析、の3点を目的とした。本研究で得られる新知見は、他のアミロイド沈着における臓器障害機序の解明にも応用でき、その学術的波及効果は大きく、難病であるヒトアミロイドーシスの病態解明、予防・治療法の開発に貢献できると考えられた。平成29年度の研究計画①として挙げた、β2-mアミロイド線維による滑膜細胞死の分子機構の解析にあたり、まずウサギ由来滑膜細胞（HIG-82）を用いた実験系において、アミロイド線維がエンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれてリソソームへ運ばれ、ネクローシス及びアポトーシスを引き起こすことを、LDHアッセイ、MTTアッセイ、透過型電子顕微鏡観察、及び共焦点レーザー顕微鏡観察により確認した。引き続き、ネクローシス/アポトーシスの詳細な解析のため Annexin V/Propidium iodide（PI）の蛍光二重染色の準備を進めているところであったが、研究代表者が平成30年3月31日付で退職し、研究を中断することとなった。

This study aims to clarify the development of dialysis therapy for the prevention and treatment of degenerative spondyloarthrosis, osteonecrosis, and arthrosis in vitro, using cultured cells, dialysis therapy, and β2-glucosamine (β2-m)-glucosamine. Specifically,(1) the molecular mechanism of β2-m-induced synovial cell death was clarified;(2) the stimulation and activation of β2-m-induced synovial cell was analyzed;(3) the cytotoxicity of β2-m-induced synovial cell death was analyzed; and (4) the three objectives were discussed. This study has gained new insights into the application of the mechanism of organ dysfunction and its impact on the development of prevention and treatment methods. Research Plan for 2009:1. Analysis of the Molecular Mechanism of Synovial Cell Death by β2-m-3-D-3 - 3-D-3-D-3 - 3-D-3 - 3-D-3-D-3 - 4-D-3-D-3 - 4-D-3 - 4-D-4 - 4-D-4 - 4 Transmission electron microscopy, confocal microscopy and electron microscopy Detailed analysis of Annexin V/Propidium iodide (PI) and preparation for fluorescent double staining were carried out on March 31, 2010. The representative of the study resigned and the study was discontinued.