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肝細胞増殖因子(HGF)による細胞増殖制御に関わる新しい制御因子の機能解析

肝细胞生长因子（HGF）参与细胞增殖控制的新调节因子的功能分析

基本信息

批准号：
23570158
负责人：
喜多村直実
金额：
$ 3.49万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

肝細胞増殖因子(HGF)によるがん細胞の増殖制御に関わる新しい制御因子について、HGFにより増殖が抑制されるヒト肝がん由来細胞株HepG2を用いて解析を行い以下の結果を得た。1、Skp2をノックダウンしたHepG2細胞では転写因子Mycの活性が減少し、一方Skp2を過剰発現した細胞ではHGF処理により抑制したMycの転写活性が回復した。またSCF複合体に結合できない変異型Skp2を過剰発現した細胞でもMycの転写活性が活性化した。これらの結果は、Skp2はMycの転写活性に対してSCF複合体の構成成分としてユビキチン化を促進することなく活性化に関与することを示唆している。Skp2を過剰発現した細胞ではHGF処理により抑制したld1の発現が回復した。またSkp2あるいはMycをノックダウンした細胞ではld1の発現が減少した。これらの結果は、Skp2はMycの活性を制御することによりId1の発現を調節することを示唆している。したがって、HGF処理によるSkp2の発現減少がMycの活性を抑制し、Id1の発現減少を介するHepG2細胞の増殖抑制に重要な役割を果たしていることが明らかになった。2、HepG2細胞をHGFで48時間以上処理すると増殖の抑制は不可逆的になる。この不可逆的な増殖抑制にはエピジェネティックなゲノム変化が関わっていると考えられることから、ピストンのメチル化について解析を行った。その結果、H3K9me3の核内局在が変化することが見出された。またこの局在変化はRas下流のシグナルの活性化で誘導されることが分かった。さらにChIPアッセイの結果、H3K9me3の変化は細胞増殖制御に関わる遺伝子であるp16において生じていることが明らかにされた。したがって、HGFによる長時間処理がH3K9me3の局在変化を生じ、細胞増殖制御に関わる遺伝子の発現を調節することにより不可逆的な増殖抑制を誘導することが明らかになった。

Hepatocyte growth factor (HGF) is a new factor in the regulation of cell proliferation. The following results were obtained by analyzing the HGF gene in HepG2 cells. 1. The activity of Myc in HepG2 cells was reduced, while the activity of Myc in HepG2 cells was inhibited by HGF. The SCF complex binds to a heterotypic Skp2 protein and activates Myc activity in cells. As a result, Skp2 has been shown to promote the activation of Myc in SCF complex components. Skp2 is detected by HGF treatment, which inhibits the detection of Skp1. Skp2, Myc, Myc. The result is that Skp2 regulates the activity of Myc. The decrease in Skp2 production due to HGF treatment is an important factor in the inhibition of HepG2 proliferation due to the inhibition of Myc activity and the decrease in Id1 production. 2. HepG2 cells were treated with HGF for more than 48 hours, and the inhibition of proliferation was irreversible. The irreversible growth inhibition of this disease is due to the analysis of the disease. H3K9ME3's internal affairs are in the process of transformation. In this case, Ras is the most active agent in the world. The results of ChIP, H3K9me3 and cell proliferation control are as follows: H3K9ME3 is a natural growth factor that regulates the production of DNA and the inhibition of cell proliferation.