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脱ユビキチン化酵素の網羅的な基質同定法の開発

去泛素化酶综合底物鉴定方法的开发

基本信息

批准号：
18657040
负责人：
喜多村直実
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

平成18年度に行った脱ユビキチン化酵素UBPYの網羅的な基質同定の解析により、基質候補蛋白質が多数同定された。これらのうちからUBPYと細胞内局在が一致する蛋白質の1つであるVAMP8を選び、実際にUBPYの基質であるかについて検討した。VAMP8をHeLa細胞に発現して解析したところ、VAMP8がユビキチン化を受けることがわかった。このユビキチン化レベルは、野生型UBPYの発現により減少し、酵素不活性型UBPYで増加した。またこのレベルはRNAi法を用いたUBPYのノックダウンにより増加した。これらの結果は、VAMP8が実際にUBPYの基質であることを示している。したがって網羅的なUBPYの基質同定法で同定された基質候補のうち少なくとも1つは実際に基質となっていることが明らかになった。今後は他の候補蛋白質についても解析し、網羅的な基質同定法が有効であるかをさらに検証していく必要がある。平成18年度に行った脱ユビキチン化酵素の網羅的な基質同定法が有効である可能性が高くなったので、この方法を他の脱ユビキチン化酵素USP36に応用した。その結果、360個の基質候補蛋白質が同定された。USP36の細胞内局在について解析したところ、USP36は核小体に局在した。したがってUSP36は核小体において脱ユビキチン化酵素として機能すると考えられることから、360個の候補蛋白質について核小体に局在するものを検索した。その結果、リボソーム蛋白質を含む60個の蛋白質が同定された。今後はこれらが実際にUSP36の基質であるかについて検証して行く必要がある。

In 2018, most of the substrate candidate proteins in the UBPY database were identified. UBPY is a protein protein that is present in the cellular system and is present in the matrix. VAMP8 is the first to be analyzed in HeLa. The occurrence of wild-type UBPY decreased and enzyme-inactive UBPY increased. The UBPY has been used in the development of RNAi. The result is that VAMP8 is actually UBPY matrix. The UBPY matrix is the same as the matrix. The matrix is the same as the matrix. In the future, the matrix identification method for other candidate proteins will be necessary. In 2018, the substrate identification method for the detection of enzyme activity was used in the detection of enzyme activity USP36. As a result, 360 matrix candidate proteins were identified. USP36 is an intracellular protein, USP36 is a nucleosomal protein. USP36 has 360 candidate proteins for nucleosomal enzyme function. The results showed that the protein content of the protein was 60%. In the future, it will be necessary to carry out USP36 matrix inspection.