ヒト細胞におけるクラスターDNA損傷の修復及び変異誘導機構の解明

阐明人类细胞中簇状DNA损伤修复和突变诱导机制

• 批准号: 24710065
• 负责人: 高橋 桃子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Japan Atomic Energy Agency
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24710065/
• 关键词: 動物細胞

放射線はDNA内に局所的に近接した2つ以上の化学的損傷を起こすと言われている。このようなDNA損傷は変異や細胞死の原因となる事が判っているが、ヒト細胞において変異や細胞死を誘発する機構は明らかではない。ヒト細胞における変異や細胞死を誘発するメカニズムを解明するため、人工的に設計した損傷入りプラスミドをヒト細胞に導入してその修復と変異発生の機構を解析する。更に、in vivoでのDNA-タンパク質相互作用によるDNA損傷の修復・変異発生を明らかにする。放射線特有のDNA損傷がヒト細胞内でどのような挙動を示すかを明らかにし、ヒトの放射線生物影響メカニズムに関する知見を得ることが本研究の目的である。動物細胞で使用できる損傷入りプラスミドを作成するには、(1)損傷の修復に必要である染色体外での複製に必要な遺伝子と(2)一本鎖DNAを作成するためのf1ファージの複製起点(f1 origin)の2つの機能を持つ鋳型プラスミドが必要である。このため、申請者は染色体外でのプラスミド複製を可能にするOriP遺伝子(Epstein-Barr Virus replication origin)とEBNA-1遺伝子(Epstein-Barr Virus replication origin and nuclear antigen)が組み込まれたpEBMulti-Neoプラスミドへのf1 origin遺伝子の導入を行った。導入には大腸菌XL.10goldを使用した。f1 origin遺伝子は大腸菌プラスミドpGEM-3zf(-)を鋳型としてPCRで増幅し、導入にはTakaraのIn fusion cloning法を使用した。その結果10個のコロニーが得ることができた

Radiation causes more than 2 chemical damage to DNA in close proximity. The cause of DNA damage and the mechanism for inducing DNA damage The mechanism of cell death induction, artificial design, injury introduction, repair and differentiation is analyzed. In addition, in vivo DNA-DNA interaction, DNA damage repair, heterogenesis The purpose of this study is to understand the relationship between radiation-specific DNA damage and cellular motility. Animal cells are used to create damage profiles,(1) damage repair is necessary, extra-chromosomal replication is necessary,(2) a lock DNA is created,(3) replication origin is necessary, and (4) function is necessary to maintain the type of damage profile. The applicant shall introduce the OriP gene (Epstein-Barr Virus replication origin) and EBNA-1 gene (Epstein-Barr Virus replication origin and nuclear antigen) into the pEBMulti-Neo gene. Introduction of E. coli XL.10gold f1 origin gene is used to clone E. coli by pGEM-3zf(-) amplification and Takara In fusion cloning. The result is 10

项目成果

The development of a novel plasmid construction technique for analyzing repair of clustered DNA damage in vivo

开发一种新型质粒构建技术，用于分析体内簇状 DNA 损伤的修复

• 发表时间: 2012
• 作者: 高橋桃子;鹿園直哉
• 通讯作者: 鹿園直哉