Kooperation von Carboanhydrase und Säure-/Base-gekoppelten Membrantransportern heterolog exprimiert in Xenopus-Oozyten

非洲爪蟾卵母细胞中异源表达的碳酸酐酶和酸/碱耦合膜转运蛋白的合作

• 批准号: 5367772
• 负责人: Professor Dr. Joachim W. Deitmer
• 金额: --
• 依托单位: Fachgebiet Zoologie/Neurobiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5367772?language=en
• 关键词: Kooperation; von; Carboanhydrase; und; ure

Gliazellen übernehmen in Nervensystemen wichtige Funktionen, wie z.B. die Aufrechterhaltung der ionalen Homöostase, Beseitigung von Neurotransmittern aus dem synaptischen Spalt sowie trophische Unterstützung für benachbarte Neurone. Dazu verfügen Gliazellen über eine Reihe spezifischer Membrantransporter für diese Funktionen: einen Monocarboxylattransporter (MCT), mit dem sie organische Säuren über die Membran transportieren und den Neuronen energiereiche Substrate wie Laktat, Pyruvat oder Ketonkörper zukommen lassen können; ein Glutamat-Aufnahmesystem (EAAT), mit dem sie hochaffin erregende Aminosäuren wie Glutamat, von Neuronen an erregenden Synapsen freigesetzt, aufnehmen; sowie einen Natrium-Bikarbonat-Kotransporter (NBC), mit dem sie Basenäquivalente über die Zellmembran bewegen und ihren cytosolischen pH-Wert sowie den extrazellulären pH-Wert im Gewebe regulieren können. In dem beantragten Projekt sollen jeweils zwei dieser aus Säugetieren geklonten Transporter, die alle drei nebeneinander in Gliazellen (Astrozyten) vorkommen, in Frosch-Oozyten heterolog exprimiert werden. Dazu wird RNA aus der cDNA klonierter Proteine durch in vitro Transkription hergestellt, gereinigt und isoliert, und anschießend in unreife Oozyten des Krallenfroschs Xenopus laevis injiziert. Es soll die Hypothese überprüft werden, ob es Wechselwirkungen, z.B. in Form von Kooperativität, zwischen den Transportern gibt, und welche Rollen dabei der Protonen- und andere Ionengradienten sowie die Aktivität der Carboanhydrase spielen. Nach Expression zweier Transportproteine sollen Membranstrom in der Spannungsklemme und intrazelluläre Konzentrationen von H+ und Na+, und somit Transportraten, unter verschiedenen Bedingungen in den Eizellen bestimmt werden. Ziel ist es, Aufschluß über eine mögliche Kooperativität glialer Funktionen auf der Ebene von Membrantransportern zu erhalten. Eine Kooperation verschiedener Transporter könnte Energie sparen und in einer Rückkopplung sogar "Abfallprodukte" wie das Kohlendioxid mit einbeziehen (Deitmer, 2000). (p)

神经系统中的神经胶质细胞与神经系统中的神经胶质细胞一样具有功能性。通过突触Spalt的神经递质对神经元的营养作用。Gliazellen是一种用于功能的特异性膜转运蛋白：一种单羧基转运蛋白（MCT），它与细胞膜转运蛋白和神经元能量底物（如Laktat、Pyruvat或Ketonkörper）一起作用;一种谷氨酸-乙酰氨基转移酶（EAAT），它与神经元的高亲和力氨基酸（如Glutamat）一起作用;使用一种钠-Bikarbonat-Kotransporter（NBC），其基础是产生细胞膜，其细胞溶质的pH值可以通过调节细胞膜的pH值来增加。在该工程中，有两个来自Säugetieren geklonten Transporter的项目，所有三个项目都是在Gliazellen（Astrozyten）上进行的，在Frosch-Oozyten异源测井中进行韦尔登。通过体外转录、消化和分离，获得了来自cDNA克隆蛋白的RNA，并将其接种于非洲爪蟾的非活卵中。这是假设的结果，韦尔登是假设的结果。在Form von Kooperativität中，zwischen den Transportern gibt，und welche Rollen dabei der Protonen- und andere Ionengradienten sowie die Aktivität der Carboanhydrase spielen。Nach Expression zweier Transportproteine sollen Membranstrom in der Spannungsklemme und intrazelluläre Konzentrationen von H+ und Na+，und somit Transportaten，unter verzedenen Bedingungen in den Eizellen bestimmt韦尔登. Ziel is，Aufschlüber eine mögliche Kooperativität glialer Funktionen auf der Ebene von Membrantransportern zu erhalten. Eine Cooperation vercedener Transporter könnte Energie sparen und in einer Rückkopplung sogar“Abfallprodukte”wie das Kohlendoxid mit einbeziehen（Deitmer，2000）.（p）