インフルエンザウイルスの病原性メカニズムの解析

点击翻译按钮获取中文摘要

インフルエンザウイルス病原性メカニズムを明らかにするため、インフルエンザウイルスが持つ特有のRNAポリメラーゼに着目し、RNAポリメラーゼによるRNA合成に関与する宿主のタンパク質同定・解析を目的とした。インフルエンザウイルスのRNAポリメラーゼによる遺伝子発現に影響を与える宿主タンパク質を探索するため、スクリーニング系を構築した。ウイルス遺伝子をリポーター遺伝子に置き換えその発現を指標とし、宿主タンパク質の探索を行った。この系を用いウイルスRNA遺伝子発現を上昇させるものとしてRuvB-like2(N末が欠損したもの)を同定した。RuvB-like2の全長をクローニングし過剰発現させた細胞においてウイルスのRNA合成ならびにウイルスの増殖が抑制された。siRNAを用いたヒトRuvB-like 2ノックダウン細胞においてウイルスRNA合成量ならびにウイルスの増殖が上昇した。以上のことからRuvB-like 2はインフルエンザウイルスの複製を抑制していることが示唆された。免疫沈降法を用いてウイルスタンパク質とRuvB-like 2の相互作用を解析したところRuvB-like2はPB1、PB2、NPと相互作用することが認められた。さらに、Bimolecular fluorescence complementation(BiFC)アッセイを行ったところRuvB-like2とNPの細胞内における相互作用が確認できた。またBiFCアッセイによりRuvB-like 2の量依存的にNP-NP間の相互作用が減少することが確認された。このことからRuvB-like 2がNPのオリゴマー形成を阻害し、インフルエンザウイルスのRNA合成ならびに増殖を阻害していることを示した。本研究はウイルスのRNA合成を阻害する宿主タンパク質を同定し解析したことから、ウイルス増殖を抑制する宿主抗ウイルス応答の解明に重要な貢献をなすと考えられる。