ヒトRNAポリメラーゼと基本転写因子TFIIHとの複合体の構造モデルの構築

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RNAポリメラーゼ(RNAP)と基本転写因子TFIIHはどちらも10個以上のサブユニットから成る超分子複合体であり、構造の大部分はX線結晶回折法(X線)やクライオ電子顕微鏡(電顕)によって解かれている。しかし、外に突き出たテールやドメイン等は運動性が高い為に見えない。申請者らは、既知のRNAPとTFIIHのX 線構造解析や電顕構造解析で見えていない領域間の新たな相互作用を見出した。本研究では、見えている領域を含んだ相互作用領域の複合体構造を核磁気共鳴 (NMR)法で決定し、見えていない領域を含むRNAPとTFIIHとの複合体の構造モデルを構築する。本年度は、RNAPサブユニットとTFIIH p62サブユニットの複合体のNMR構造を決定した。13C,15N標識 RNAP サブユニットと非標識 TFIIH p62 サブユニットの複合体と13C,15N 標識 TFIIH p62 サブユニットと非標識 RNAP サブユニットの複合体を調製し、多次元NMR 測定、及び解析を行った。距離、及び二面角制限情報を収集後構造計算し初期構造を得た。精密化を繰り返し、最終構造を決定した。