細菌べん毛固定子のナトリウム取り込み活性測定系の構築とエネルギー変換機構の解明
细菌鞭毛定子吸钠活性测定系统的构建及能量转换机制的阐明
基本信息
- 批准号:08J04323
- 负责人:
- 金额:$ 0.77万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2008
- 资助国家:日本
- 起止时间:2008 至 2010
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
細菌のべん毛モーターは、膜内外の共役イオンの電気化学的ポテンシャル差をべん毛の回転に変換する。べん毛モーターの回転機構の解明のためには、エネルギー変換ユニットがどのようにイオンを透過しているのか明らかにしなければならない。そのために、PomA/B複合体のNa^+取込み活性の測定と、イオン透過経路を形成すると思われる残基への変異導入による運動能の解析をし、イオン透過と回転力発生機構の解明を目指した。無細胞タンパク質合成系を用いたPomA/Bの合成、あるいは、CHAPS、Cymal-5によるPomA/B複合体の精製をし、プロテオリポソームに再構成したPomA/BのNa^+の取込み活性の測定を試みたが、有意なNa^+の取込みは検出できなかった。PomBの膜貫通領域に変異を導入し、運動能回復変異体の取得を行った。PomB-L28A/C31Aの運動能を回復させる変異が、PomAの4番目の膜貫通領域のPomA-L183Fであることを見出し、PomAの4番目の膜貫通領域がイオン透過経路に重要であることが示唆された(BIOPHYSICS誌)。また、共役イオンの結合残基であるPomB-D24の電荷を無くしても、べん毛を回転させることができる変異をPomAの膜貫通領域で見つけた(PomA-N194D/PomB-D24N)。PomA-N194はPomB-D24の機能を代替でき、PomA-N194とPomB-D24がNa^+結合ポケットを形成することが示唆された。また、負電荷を持つ側鎖の長さを変化させると運動能が低下することから、適切な側鎖の長さが固定子の機能に対して重要であることが示唆された。これらの成果は、Journal of Moleclular Biology誌に掲載された。本年度の研究によって、共役イオンの結合、透過メカニズムとエネルギー変換機構に対する新たな知見を得ることができた。
The electrochemistry of bacteria in and out of the membrane The structure of the system is composed of two parts: one part is composed of two parts: one part is composed of two parts: the other part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the third part is composed of three parts: the third part is composed of two parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the fourth part is composed of four Determination of Na^+ binding activity of Pom A/B complex, analysis of kinetic energy through pathway formation, and elucidation of mechanism of cyclic activation Cell Free Mass Synthesis System: Synthesis of PomA/B, Purification of PomA/B Complexes, Restructuring of PomA/B Complexes, Determination of Na^+ Extraction Activity, Intentional Na^+ Extraction and Purification of PomA/B Complexes Pom B membrane penetration field different introduction, exercise energy recovery different acquisition PomB-L28A/C31A motion energy recovery changes, PomA-L183F of PomA's 4-segment membrane penetration field changes, PomA's 4-segment membrane penetration field changes, and PomA's 4-segment membrane penetration field changes (BIOPHYSICS). The binding residues of PomB-D24 are free of charge, and the membrane penetration domain of PomA is different (PomA-N194D/PomB-D24N). PomA-N194 and PomB-D24 are functional substitutes. The length of the side lock is reduced due to the negative charge, and the length of the side lock is important for the function of the stator. The results were published in the Journal of Molecular Biology. This year's research is based on the combination of research and development, and new knowledge is obtained through the transformation of research and development institutions.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Analysis of the coupled ion binding site in the stator complex of Na^+-driven flagellar motor.
Na^驱动鞭毛马达定子复合体中耦合离子结合位点的分析。
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Megumi Yoshida;Takayuki Saito;Satoshi Ishii;Shigeto Otsuka;Keishi Senoo;Masafumi Koike;Yuki Sudo;Hiroyuki Terashima;Hiroyuki Terashima;寺島浩行;寺島浩行;Hiroyuki Terashima
- 通讯作者:Hiroyuki Terashima
細菌べん毛モーター固定子のナトリウム流入活性の測定の試み
尝试测量细菌鞭毛运动定子的钠流入活性
- DOI:
- 发表时间:2008
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Megumi Yoshida;Takayuki Saito;Satoshi Ishii;Shigeto Otsuka;Keishi Senoo;Masafumi Koike;Yuki Sudo;Hiroyuki Terashima;Hiroyuki Terashima;寺島浩行;寺島浩行;Hiroyuki Terashima;寺島浩行;寺島浩行
- 通讯作者:寺島浩行
The essential Asp residue of the ion binding site in the stator protein, PomB, can be replaced into the partner stator protein, Pom in bacterial flagellar motor
定子蛋白 PomB 中离子结合位点的必需 Asp 残基可被替换为细菌鞭毛运动中的伴侣定子蛋白 Pom
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Megumi Yoshida;Takayuki Saito;Satoshi Ishii;Shigeto Otsuka;Keishi Senoo;Masafumi Koike;Yuki Sudo;Hiroyuki Terashima;Hiroyuki Terashima
- 通讯作者:Hiroyuki Terashima
細菌べん毛固定子複合体の共役イオンの透過経路と結合残基
细菌鞭毛定子复合物的共轭离子渗透途径和结合残基
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Megumi Yoshida;Takayuki Saito;Satoshi Ishii;Shigeto Otsuka;Keishi Senoo;Masafumi Koike;Yuki Sudo;Hiroyuki Terashima;Hiroyuki Terashima;寺島浩行;寺島浩行
- 通讯作者:寺島浩行
Isolation of Basal Bodies with C-Ring Components from the Na+-Driven Flagellar Motor of Vibrio alginolyticus
- DOI:10.1128/jb.01121-09
- 发表时间:2010-01-01
- 期刊:
- 影响因子:3.2
- 作者:Koike, Masafumi;Terashima, Hiroyuki;Homma, Michio
- 通讯作者:Homma, Michio
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- DOI:
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- 影响因子:0
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本間 道夫
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