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透明メダカを用いた心筋再生の定量的評価系の開発

透明青鳉心肌再生定量评价系统的开发

基本信息

批准号：
20650059
负责人：
大石勲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

小型魚類メダカ及びゼブラフィッシュを用いて心筋細胞の可視化と定量評価系の開発を試みた。メダカmlc2a遺伝子の上流1.2kbおよび2.0kbを単離し、蛍光分子Kaede遺伝子の上流に配置し、これを透明メダカに遺伝子導入した。1.2kbを有するトランスジェニックメダカは心筋特異的に蛍光分子を発現するが、心筋全体で均一には発現せず、再生研究に用いるには不適であった。2.0kbを有するメダカは現在スクリーニング中である。メダカmlc2a上流領域2.0kb,1.2kbいずれのベクターもゼブラフィッシュ胚に顕微注射した際には心筋特異的かつメダカよりも広範にKaede遺伝子の発現を誘導しており、メダカでのmlc2aの発現はゼブラフィッシュよりも厳密に制御されている可能性が考えられる。一方、ゼブラフィッシュのmlc2a上流領域にKaede蛍光分子を誘導させるトランスジェニックゼブラフィッシュの作製を行い、心筋細胞特異的に蛍光分子を発現する個体を得た。このトランスジェニックフィッシュの成魚を開胸し、紫外線照射により緑色から赤色変光後、タングステン針で傷をつけ、強緑色-弱赤色の再生心筋の発生を経時的に検討した。その結果、損傷後14日で明瞭な強緑色-弱赤色の再生心筋を再現性良く認めるとともに、FGFシグナルの抑制による心筋再生の抑制とFGF添加による心筋再生の増進を認めた。このことは新たに心筋再生の定量評価系を樹立したことに留まらず、心筋再生制御とその評価系を開発したという点で非常に大きな意義を持つと考えられる。

Visualization and quantitative evaluation of cardiac muscle cells in small fishes such as hamsters and fishes were carried out.メダmlc2a伝子の上流1.2kbおよび2.0kbを単里し,荍光moleculeKaede伝子の上上にconfigurationし,これをtransparent メダカに伝子 Importした. 1.2kbを有するトランスジェニックメダカはcardiospecific photomolecule を発appearするが、The overall uniformity of the heart and muscle is では発appears せず、Regenerative research is used and いるには is uncomfortable であった. 2.0kbを有するメダカはNow スクリーニング中である.メダmlc2a upper domain 2.0kb, 1.2kb いずれのベクターもゼブラフィッシュEmbryonic microinjection したInternational にはcardiac muscle specific かつメダカよりも広Fan にKaede 伝子の発 appear をinducing しており、メダカでのmlc2aの発Now it is possible to control the possibility of using the secret control system. One party, ゼブラフィッシュのmlc2a upstream field にKaede荍光moleculeをinducing させるトランスジThe ェニックゼブラフィッシュの产を行い, the cardiac cell-specific に蛍光molecule を発appears and the individual is obtained.このトランスジェニックフィッシュの成鱼をOpen the chestし, UV irradiationによりGreenからRed light Afterwards, the タングステンneedle injury をつけ, the strong green-weak red の発生を経时に検した. The result, the strong green-weak red regenerated heart muscles were clear 14 days after the injury, and the reproducibility was good. FGF has been shown to inhibit the regeneration of the heart muscle, and the addition of FGF can also increase the regeneration of the heart muscle. Quantitative evaluation of the new and new heart muscle regeneration system, establishment of new heart muscle regeneration, and heart muscle regeneration The control system of the review system is very high and the meaning is very high.