レトロウイルス組込みによる突然変異誘導を利用したHIV感染制御因子の探索

本研究は正常のT細胞においてHIV-1感染を支持ないし阻害する宿主因子を探索することを目的として研究を行っている。特にウイルスへの細胞侵入からインテグレーションまでにおいて、感染に対して負に関与する宿主因子を探索する方法の開発を試みている。方法としてはHIV-1感染感受性細胞にレトロウイルスの宿主ゲノムへの組み込みを利用した突然変異導入法を使用し、内因性の遺伝子を活性化することにより突然変異細胞集団を形成し、これらの細胞集団に感染性HIV-1やHSV-TKやmouse CD24(HSA)をリポーターとして有するHIV-1を感染させ、感染を免れて生き残ってくる細胞集団を選択濃縮し、レトロウイルスベクターによって活性化している遺伝子をクローニングおよび同定していく。昨年度は突然変異導入レトロウイルスベクターを構築したがウイルス力価が低く、効率のいい形質転換ができなかった。そこで本年度はpuromycin耐性遺伝子を有するHIVベクターの3'LTRのU3領域にプロモーター、FLAGタグならびにスプライスドナー(SD)を逆位に挿入したレンチウイルスベクターを構築した。このベクターの構築によりレトロウイルスベクターに比較して高力価のウイルスを回収することが可能になった。そこでこのベクターをHIV-1感染感受性細胞に導入し形質の異なる突然変異細胞集団を作製した。現在この突然変異細胞集団にHIVを感染させ、HIV-1感染抵抗性細胞を樹立している。

本研究は正常のT細胞においてHIV-1感染を支持ないし阻害する宿主因子を探索することを目的として研究を行っている。特にウイルスへの細胞侵入からインテグレーションまでにおいて、感染に対して負に関与する宿主因子を探索する方法の開発を試みている。方法としてはHIV-1感染感受性細胞にレトロウイルスの宿主ゲノムへの組み込みを利用した突然変異導入法を使用し、内因性の遺伝子を活性化することにより突然変異細胞集団を形成し、これらの細胞集団に感染性HIV-1やHSV-TKやmouse CD24(HSA)をリポーターとして有するHIV-1を感染させ、感染を免れて生き残ってくる細胞集団を選択濃縮し、レトロウイルスベクターによって活性化している遺伝子をクローニングおよび同定していく。昨年度は突然変異導入レトロウイルスベクターを構築したがウイルス力価が低く、効率のいい形質転換ができなかった。そこで本年度はpuromycin耐性遺伝子を有するHIVベクターの3'LTRのU3領域にプロモーター、FLAGタグならびにスプライスドナー(SD)を逆位に挿入したレンチウイルスベクターを構築した。このベクターの構築によりレトロウイルスベクターに比較して高力価のウイルスを回収することが可能になった。そこでこのベクターをHIV-1感染感受性細胞に導入し形質の異なる突然変異細胞集団を作製した。現在この突然変異細胞集団にHIVを感染させ、HIV-1感染抵抗性細胞を樹立している。