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レトロウイルス組込みによる突然変異誘導を利用したHIV感染制御因子の探索

通过逆转录病毒整合诱导突变寻找 HIV 感染控制因素

基本信息

批准号：
20659073
负责人：
前田洋助
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659073/
关键词：
HIV 宿主因子感染制御突然変異導入レトロウイルス

项目摘要

本研究は正常のT細胞においてHIV-1感染を支持ないし阻害する宿主因子を探索することを目的として研究を行っている。特にウイルスへの細胞侵入からインテグレーションまでにおいて、感染に対して負に関与する宿主因子を探索する方法の開発を試みている。方法としてはHIV-1感染感受性細胞にレトロウイルスの宿主ゲノムへの組み込みを利用した突然変異導入法を使用し、内因性の遺伝子を活性化することにより突然変異細胞集団を形成し、これらの細胞集団に感染性HIV-1やHSV-TKやmouse CD24(HSA)をリポーターとして有するHIV-1を感染させ、感染を免れて生き残ってくる細胞集団を選択濃縮し、レトロウイルスベクターによって活性化している遺伝子をクローニングおよび同定していく。昨年度は突然変異導入レトロウイルスベクターを構築したがウイルス力価が低く、効率のいい形質転換ができなかった。そこで本年度はpuromycin耐性遺伝子を有するHIVベクターの3'LTRのU3領域にプロモーター、FLAGタグならびにスプライスドナー(SD)を逆位に挿入したレンチウイルスベクターを構築した。このベクターの構築によりレトロウイルスベクターに比較して高力価のウイルスを回収することが可能になった。そこでこのベクターをHIV-1感染感受性細胞に導入し形質の異なる突然変異細胞集団を作製した。現在この突然変異細胞集団にHIVを感染させ、HIV-1感染抵抗性細胞を樹立している。

This study aims to explore host factors that support HIV-1 infection in normal T cells. In particular, the development of methods for exploring host factors associated with cell invasion and infection is being explored. Methods: HIV-1 infection-susceptible cells are infected with HIV-1, HSV-TK and mouse CD24 (HSA), and the host cells are infected with HIV-1, HSV-TK and mouse CD24 (HSA). The cell population of the infected cells is concentrated, reactivated and stabilized. Yesterday, the introduction of different types of equipment to build a low cost, efficiency and quality of the medium change. This year, the puromycin resistant gene has been found in the U3 domain of HIV 3'LTR, and the FLAG gene has been inverted into the SD domain. This is the first time that the United States has been involved in the construction of such a project. In addition, HIV-1 infection-susceptible cells are introduced into the genome to control the proliferation of mutant cells. Now, suddenly, different cell populations are infected with HIV and resistant to HIV-1 infection are established.