腎マクラデンサ細胞のゲノミクスとプロテオミクス

肾 Macradensa 细胞的基因组学和蛋白质组学

• 批准号: 20659136
• 负责人: 河原 克雅
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659136/
• 关键词: TGF機構; マクラデンサ細胞; プロスタグランジンE_2; MALDI-TOF-MS; macula densa; nNOS; microarray analysis; aldosterone; dexamethasone; furosemide; nitric oxide; MALDI-TOF MS; reductase domain; calmodulin binding site

株化したマクラデンサ細胞(NE-MD細胞)において、遺伝子(DNAマイクロアレイ解析)と機能タンパク(アガロース2次元電気泳動、MALDI-TOF-MS)の解析を行った。NE-MD細胞に12μM furosemide(Furo)を添加後、当該遺伝子の発現量をコントロールと比較した。その結果、COX-2,EP4(PGE_2受容体)遺伝子の発現量は経時的に増加し、各々1.4倍に増加した(120分)。NE-MD細胞では、細胞外[Cl^-]を低下させたり、FuroでCl^-輸送体(NKCC2)を阻害したりしなくても、forskolin(For)添加によって細胞内cAMP濃度を上昇させることにより、COX-2発現が亢進した。一方、Cl^-freeでCOX-2発現が亢進している状態では、For添加による相加的な発現亢進は認められなかったが、H-89添加によって発現亢進が抑えられることから、cAMP-PKA系が重要な役割を担っていることが明らかになった。また、RT-PCRの結果、4つのEP受容体アイソフォーム(EP1-EP4)の内、EP4の発現を確認した。また、PGE_2のEC_<50>=4.52nM(NE-MD細胞)は、CHO細胞の数値(3.91+/-0.31nM:Nishigaki N et al,1996)に近似していた。さらに、NE-MD細胞外に5pMPGE_2を添加すると、COX-2発現量が有意に増加した(5hr後)が、EP4受容体アンタゴニスト(AH-23848)存在下では、Cl^-free誘導PGE_2産生量は大幅に低下した。一方、Cl^-free刺激によりEP4の発現量が増加する点も重要である。通常、EP4受容体にPGE_2が感作すると脱感作が起こるが、NE-MD細胞では、Cl-free刺激によりPGE_2産生が増えて細胞膜表面上のEP4受容体に感作してもEP4発現が亢進した。以上の結果から、COX-2発現調節におけるEP4を介した正のフィードバック機構は、TGF機構の修飾が長期にわたる場合でも、安定してPGE_2を供給するために非常に重要であると考えられる。最後に,NE-MD細胞のFuro誘導タンパク質をアガロース2次元電気泳動で展開し、MALDI-TOF-MSで解析した。発現が増加したタンパク質としてサイトケラチン(CK)18と19を同定した。CK18とCK19(上皮細胞に発現する中間径フィラメントの構成要素)は、細胞の強度維持に必要である。

The analysis of DNA, DNA and function of NE-MD cells (NE-MD cells) is carried out by MALDI-TOF-MS. When 12μM furide (Furo) was added to NE-MD cells, the amount of furide produced was compared. The results showed that COX-2 and EP4 (PGE_2 receptor) increased by 1.4 times (120 points) respectively. In NE-MD cells, extracellular [Cl^-] was reduced, Furo de Cl^-transporter (NKCC2) was blocked, and the intracellular cAMP concentration was increased due to the addition of forskolin(For), and COX-2 expression was increased. One side, Cl^-free, COX-2 appears hyperactive, For addition, addition, COX-2 appears hyperactive, H-89 addition, COX-2 appears hyperactive, cAMP-PKA system is important. The results of RT-PCR and the detection of EP4 were confirmed. The EC of PGE_2 <50>was 4.52 nM (NE-MD cells), which was similar to that of CHO cells (3.91+/-0.31 nM:Nishigaki N et al,1996). In addition, COX-2 production increased significantly in the presence of 5pMPGE2 (AH-23848) and Cl-free PGE2 production decreased significantly in the presence of EP4 receptor (AH-23848). One side, Cl^-free stimulation increases the amount of EP4 produced. PGE_2 induction and desensitization in EP4 receptor cells were usually increased by Cl-free stimulation in NE-MD cells. The above results show that the regulation of COX-2 production is very important in the long-term stability of PGE_2 supply. Finally,NE-MD cell Furo induced protein migration was analyzed by MALDI-TOF-MS. It appears that the increase in the quality of the product is the same as the increase in the quality of the product. CK18 and CK19 (components of epithelial cell development) are essential for cell strength maintenance.

项目成果

Prostaglandin E_2 stimulates the expression of COX-2 in mouse macula densa cell line.

前列腺素 E_2 刺激小鼠致密斑细胞系中 COX-2 的表达。

• 发表时间: 2011
• 作者: Fukuda H.;Kawahara K.
• 通讯作者: Kawahara K.

A role of V1a receptor(V1aR)in renal H+ excretion : Acid-base balance in mice lacking V1aR.

V1a 受体 (V1aR) 在肾 H 排泄中的作用：缺乏 V1aR 的小鼠的酸碱平衡。

• 发表时间: 2009
• 作者: 安岡有紀子;小林瑞佳;田上昭人;河原克雅
• 通讯作者: 河原克雅

A role of V1a receptor(V1aR)in water/electolyes metabolism : Electrolytes balance in mice lacking V1aR mice lacking V1aR.

V1a 受体 (V1aR) 在水/电解质代谢中的作用：缺乏 V1aR 的小鼠中的电解质平衡 缺乏 V1aR 的小鼠。

• 发表时间: 2009
• 作者: 小林瑞佳;安岡有紀子;田上昭人;河原克雅;岡本浩嗣
• 通讯作者: 岡本浩嗣

Different Localization of ATP Sensitive K+ Channel Subunits in Rat Testis

大鼠睾丸中 ATP 敏感 K 通道亚基的不同定位

• DOI: 10.1002/ar.21348
• 发表时间: 2011
• 期刊: The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology
• 作者: Ming Zhou;Hui;O. Tanaka;M. Sekiguchi;K. Kawahara;H. Abe
• 通讯作者: H. Abe

Upregulation of V1a receptor mRNA by acidosis in TAL and intercalated cells of OMCD in mouse kidney.

酸中毒对小鼠肾脏 TAL 和 OMCD 闰细胞中 V1a 受体 mRNA 的上调。

• 发表时间: 2009
• 作者: 安岡有紀子;小林瑞佳;佐藤雄一;河原克雅
• 通讯作者: 河原克雅