マウス難聴モデルを用いた内耳再生の試み

尝试使用小鼠听力损失模型进行内耳再生

• 批准号: 20659265
• 负责人: 木本 誠
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659265/
• 关键词: 内耳; 再生医学; 有毛細胞; 幹細胞; 移植; 難聴モデル

ES細胞の感覚器官細胞、特に内耳感覚細胞(有毛細胞)への分化誘導法の確立は、有毛細胞の分化メカニズムの解明とES由来細胞の細胞移植への応用にも期待できる。そこで本研究では、ES細胞から有毛細胞特異的な分化誘導法の開発とそれを用いた難聴モデルマウスの治療を試みた。昨年度、マウスES細胞に内耳感覚細胞分化のマスター遺伝子Brn3.1、Math1の発現制御システムを導入したES細胞(Math-Brn-ES)の分化誘導条件を検討したところ、Brn遺伝子を強制発現させ、さらに骨形成因子BMPを添加した条件で、最も高効率に誘導できることが明らかとなった。そこで、本年度、この分化誘導した細胞を同系マウスに移植し、組織レベルでの解析をさらに進めた。エタクリン酸、カナマイシンにより難聴モデルを作成した後、ES細胞から分化誘導した有毛細胞様細胞(hair cell-like cells : HCLCs)を移植した場合、蝸牛内の血管条および基底側に沿った部位に多く生着していることが確認され、それらの細胞は免疫組織学的解析により有毛細胞のmarkerであるmyosin6, Brn3.1, acetylcholine receptorなどを発現していることが確認された。また、ラセン神経節の部位にも生着している細胞が確認された。さらに聴力回復能に寄与できるのかを解析すべく、脳幹反応ABRを用いた生理的解析を行ったが、反応の検出には至らなかった。移植したES細胞由来のHCLCsが移植後に内耳回復に寄与するのかの課題をクリアーすべく、今後はさらなる移植条件の検討が必要になると考えられた。

ES cells are sensitive organ cells, special inner ear sensory cells (hairy cells), and the differentiation induction method has been established. Differentiation of hairy cells has been explained, and ES-derived cells have been transplanted and are expected to be used. In this study, we tried to use the hair cell-specific hair cell differentiation induction method to treat ES cells. Last year, Math1's ES cells were differentiated into inner ear sensory cells, Brn3.1, and Math1's current system was introduced into ES cells (Math-Brn-ES). Differentiation-inducing conditions: したところ, Brn, ところ, Brn, forced appearance, させ, さらにbone formation The factor BMP is added to the condition, and the most efficient induction method is the same.そこで, this year, このdifferentiation induction したcells をsyngeneic マウスにtransplantationし, tissue レベルでのanalyses をさらに入めた. After the preparation of erythroic acid and カナマイシンによりぴモデルを, ES cells can be differentiated and induced into hair cell-like cells: In the case of transplantation of HCLCs), the blood vessel strip in the snail can be found on the basal side and along the basal side of the snail. Confirmation of immunohistological analysis of され、それらのcellsによりhairy cellsのmarkerであるmyosin6, Brn3.1, acetylcholine receptorなどを発appearsしていることがconfirmationされた.また, ラセン神経sectionの区にも生している cells がconfirm された.さらに聴能に发与できるのかをanalytic すべく、脳干 Reflection AB Rを用いたphysiological analysisを行ったが, 濜の検出には to らなかった. The origin of transplanted ES cells, HCLCs, and the recovery of the inner ear after transplantation.をクリアーすべく、The conditions for transplantation in the future are necessary and necessary.