Targeted mutagenesis in somatic for controlled transgenic expression in pics

体细胞定向诱变以控制图片中的转基因表达

• 批准号: 5378934
• 负责人: Professor Dr. Heiner Niemann
• 金额: --
• 依托单位: Klinik für Gastroenterologie, Hepatologie und Endokrinologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5378934?language=en
• 关键词: Targeted; mutagenesis; somatic; controlled; transgenic

Ziel dieses Projektantrages ist es, Methoden zur gerichteten Mutagenese in primären porcinen Zellen zu entwickeln. Dazu sollen Verfahren zur längerfristigen Kultivierung primärer porciner Zellen etabliert und diese auf ihre Entwicklungsfähigkeit nach Kerntransfer charakterisiert werden. Es wird eine zweistufige Targeting-Strategie verfolgt, mit der zunächst eine Markerkassette in einen definierten Genlocus homolog rekombiniert und unter Kontrolle eines endogenen Promotors exprimiert wird. Nach Evaluierung des Integrationsortes im Hinblick auf Expressionshöhe, -stabilität und Freiheit von Nebeneffekten wird in einem zweiten Schritt die Markerkassette über eine Rekombinase-vermittelte Rekombination gerichtet gegen das eigentliche Transgen ausgetauscht. Zellen mit dem gewünschten Rekombinationsereignis werden zur Generierung von Knock-in-Tieren eingesetzt. Für den knock-in sind transplantationsrelevante Gene, wie Thrombomodulin, Apoptose-Regulatoren und Regulatoren von MHC Klasse II-Molekülen vorgesehen, um verbesserte Tiermodelle für die Xenotransplantation zu erstellen.

Ziel dieses Projektantrages ist es，Methoden zur gerichteten Mutagenese in primären porcinen Zellen zu entwickeln.因此，必须对Zellen进行长时间的测试，使其能够在韦尔登特性下实现其快速成型。这将是一种双重靶向治疗方法，它使用一种确定的基因座同源物的标记盒，并控制内源性启动子的表达。在表达上对Hinblick的整合分类进行评估后，Nebeneffekten的稳定性和弗赖海特将在一个两个标记盒中产生一个Rekombinase-vermittelte Rekombination gerichtet gegen das eigentliche Transgen ausgetauscht。Zellen mit dem gewünschten Rekombinationsereignis韦尔登zur Generierung von Knock-in-Tieren eingesetzt.通过敲入与移植相关的基因，如Thrombomodulin、Apoptose-Regulatoren和Regulatoren等MHC Ⅱ类分子，建立了异种移植模型。