Novel assay for determination of baculovirus titer using host cell binding of enzyme-displayed baculovirus

利用酶展示杆状病毒的宿主细胞结合测定杆状病毒滴度的新方法

• 批准号: 21560805
• 负责人: KIKIUCHI Ken-ichi
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21560805/
• 关键词: 生物機能工学; 生体認識; ウイルス; バイオテクノロジー; 昆虫細胞; バキュロウイルス; 酵素反応; リアルタイムPCR; ウイルス検出; ウイルス力価; 酵素展示

The present study aimed at developing a novel assay method using a baculovirus (BV)-host cell binding for the determination of BV titer. First, we constructed recombinant BV displaying either GST or EGFP on GP64 envelope protein in order to distinguish between infected and uninfected cells. However, the protein probes displayed on BVs were not sensitive enough to use for this purpose. In addition, it was so difficult to produce the recombinant BVs because of their high susceptibility to endogenous proteases. Second, we examined the BV-host cell binding conditions to separate active and inactive BVs. As a result, it was suggested that the BV-host cell binding was applicable to the BV titer determination by combining with real-time PCR.

本研究旨在开发一种新的检测方法，使用杆状病毒（BV）-宿主细胞结合测定BV滴度。首先，我们构建了在GP 64包膜蛋白上展示GST或EGFP的重组BV，以区分感染和未感染的细胞。然而，展示在BV上的蛋白质探针不够灵敏，无法用于此目的。此外，由于其对内源性蛋白酶的高度敏感性，生产重组BV非常困难。其次，我们检查了BV-宿主细胞结合条件以分离活性和非活性BV。结果表明，BV-宿主细胞结合法与实时荧光定量PCR法相结合可用于BV效价的检测。

项目成果

蛍光タンパク質融合GP64 の構築と昆虫細胞への結合性

荧光蛋白融合蛋白GP64的构建及其与昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上 亮;後藤 猛;菊地 賢一
• 通讯作者: 菊地 賢一

Prorenin processing enzyme (PPE) produced by baculovirus-infected Sf-9 insect cells : PPE is the cysteine protease encoded in the AcMNPV gene

杆状病毒感染的 Sf-9 昆虫细胞产生的肾素原加工酶 (PPE) ：PPE 是 AcMNPV 基因中编码的半胱氨酸蛋白酶

• 发表时间: 2010
• 期刊: Biosci. Biotechnol. Biochem
• 作者: Gotoh;T.;Awa;H.;Kikuchi;K.-I.;Nirasawa;S.;Takahashi;S
• 通讯作者: S

GP64-蛍光プローブ融合タンパク質の構築とSf-9昆虫細胞への結合

GP64-荧光探针融合蛋白的构建及与Sf-9昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上 亮;後藤 猛;菊地 賢一
• 通讯作者: 菊地 賢一

Real-time PCRを利用したバキュロウイルスタイター測定のための基礎検討

使用实时PCR测量杆状病毒滴度的基础研究

• 发表时间: 2012
• 作者: 佐藤 真一;佐藤 愛香;菊地 賢一;後藤 猛
• 通讯作者: 後藤 猛

蛍光タンパク質融合GP64の構築と昆虫細胞への結合性

荧光蛋白融合蛋白GP64的构建及其与昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上亮;後藤猛;菊地賢一
• 通讯作者: 菊地賢一