ヒト血球系安定細胞株を用いた化学物質リスク評価システムの開発

利用稳定的人血细胞系开发化学物质风险评估系统

基本信息

批准号：
09F09091
负责人：
松永是
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ヒト血球系安定細胞株を樹立し、各血球細胞に対する化学物質のリスク評価システムを開発することを目的としている。本年度は、各血球細胞の安定細胞株樹立に先立ち、様々な血球細胞への分化が可能なヒト造血幹細胞に着目し、この細胞の長期培養及び分化制御技術の確立を目指した。さらに化学物質リスク評価を視野に入れた細胞培養チップの構築に着手した。希少細胞であるヒト造血幹細胞は非常に高価であり、また、長期培養や未分化維持の制御が困難であると言われている。本研究では、臍帯血からCD34陽性細胞として分離されてきた画分を用いて、ヒト造血幹細胞の獲得と長期培養を試みた。細胞表面マーカーに対する抗体染色、及びFACSにより解析した結果、多分化能を保持していると考えられるヒト造血幹細胞の割合がわずか3-4%の割合で存在していることが明らかとなった。そこで、本画分をソーティングにより回収した後、様々な培養条件(接着因子、培地組成、サイトカイン等)を検討した。その結果、ヒト造血幹細胞の細胞数を2週間でおよそ4倍、増幅可能であった。さらに、細胞培養チップの開発においては、単一細胞レベルで細胞捕捉が可能なデバイスと組み合わせた細胞培養チップを構築し、血球細胞の培養に成功した。本研究によりヒト血球系安定細胞株の樹立において、遺伝子導入を行うために必要な十分量の造血幹細胞の獲得が可能となり、今後は安定細胞株の作製に取り掛かる。さらに、ヒト血球系安定細胞株を捕捉した細胞培養チップにより、化学物質リスク評価に向けた検討を行う予定である。

这项研究旨在建立稳定的人体血细胞系，并为每个血细胞开发一个化学物质的风险评估系统。今年，在为每个血细胞建立稳定的细胞系之前，我们专注于可以区分各种血细胞的人类造血干细胞，旨在为这些细胞建立长期培养和分化控制技术。此外，我们开始考虑化学物质风险评估的细胞培养芯片。人类造血干细胞，稀有细胞非常昂贵，据说很难控制长期培养和未分化的维持。在这项研究中，我们尝试使用已从脐带血为CD34阳性细胞中分离出的分数来获取人类造血干细胞的长期培养。细胞表面标记和FACS的抗体染色分析表明，只有3-4％的人造血干细胞以一定比例的人类造血干细胞存在，这些干细胞被认为保留了多能潜在。因此，检查了各种培养条件（粘附因子，中等成分，细胞因子等）在收集这一部分之后。结果，人类造血干细胞的数量可以在两周内扩增大约四次。此外，在细胞培养芯片的开发中，将细胞培养芯片与能够在单细胞水平上捕获细胞捕获的装置结合使用，并成功培养的血细胞。这项研究将使建立稳定的人体血细胞系获得基因转移所需的足够量的造血干细胞，将来我们将开始发展稳定的细胞系。此外，我们计划使用捕获稳定的人类血细胞系的细胞培养芯片研究化学物质的风险。