マダニプロテアーゼインヒビターの機能解明と応用に関する研究

蜱蛋白酶抑制剂的功能阐明及应用研究

• 批准号: 09F09519
• 负责人: 辻 尚利
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09519/
• 关键词: マダニ; 節足動物媒介感染症; 吸血; 蛋白分解酵素; プロテアーゼインヒビター

本研究では、吸血によってマダニ中腸に取り込まれた宿主血液の消化及びバベシア原虫の伝播に関与するマダニ蛋白分解酵素の機能解明を推進し、殺ダニ剤による現行防除法に代わる有効で安全性と持続性の高いマダニ防除及び動物・ヒトバベシア症制圧技術を確立する。そのために、蛋白分解酵素の機能を制御するマダニプロテアーゼインヒビター(TPI)に焦点をあて、マダニ吸血行動と自然免疫に欠かせないヘモサイト由来のクニッツタイプキモトリプシンインヒビター(HlChI)の機能解明を行った。1.HlChIは6つのシステイン残基と3つのS-S結合が保存され、推定分子量は9.1kDaであった。2.HlChImRNAは全発育ステージで確認され、吸血によってその発現量は上方調節されていた。3.内在性HlChIの発現は、主にヘモサイトで確認された。4.HlChIは、牛膵臓キモトリプシンの加水分解作用を阻害することが確認されたが、牛膵臓トリプシンに対する阻害作用は弱く、豚エラスターゼ活性には影響が認めらなかったことから、キモトリプシンに対して特異反応を示すと考えられた。5.HlChIの活性はpH2-11、温度70℃までにおいて発揮された。6.HlChIは8M尿素及びpH8.0の2%SDS存在下で温度37℃24時間において安定であったが、2-メルカプトエタノールでは活性が完全に消失した。7.RNA干渉法で作製したHlChIノックダウンマダニでは、飽血不全と体重減少が惹起され、死滅するマダニが確認され、同時に著しい産卵数の低下が確認された。8.以上の成績より、HlChIは、高安定性のキモトリプシン特異的インヒビターであり、マダニ吸血・消化と繁殖過程の制御に重要な役割を果たしていると考えられた。

This study で は, vampire に よ っ て マ ダ ニ in intestinal に taking り 込 ま れ た host blood の digestion and び バ ベ シ ア parasite の 伝 sowing に masato and す る マ ダ の ニ protein decomposing enzyme function interpret を し, kill ダ ニ tonic に よ る current control method of generation に わ る have sharper で security と hold high 続 sex の い マ ダ ニ control and び animals, ヒ ト バ ベ シ を established す 圧 ア disease system technology Youdaoplaceholder0. そ の た め に, protein decomposing enzyme の functional を suppression す る マ ダ ニ プ ロ テ ア ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー (TPI) に focus を あ て, マ ダ ニ vampire action と natural immune に owe か せ な い ヘ モ サ イ ト origin の ク ニ ッ ツ タ イ プ キ モ ト リ プ シ ン イ ン ヒ ビ タ ー line (HlChI) の function and interpret を っ た. 1. HlChI は 6 つ の シ ス テ イ ン residues と 3 つ の S - S combination が save さ れ, presumption of molecular weight 9.1 kDa は で あ っ た. 2. The <s:1> full development of HlChImRNA ステ ステ ジで ジで confirms され, and the upward regulation of the blood-sucking によってそ <s:1> development amount されて されて た た. 3. The internal HlChI is manifested in にヘモサ, and the main にヘモサ トで is confirmed in された. 4. HlChI は is crucial, cattle Cui キ モ ト リ プ シ ン の water decomposition を resistance against す る こ と が confirm さ れ た が is crucial, cattle Cui ト リ プ シ ン に す seaborne る resistance against role は weak く, dolphin エ ラ ス タ ー ゼ active に は influence が recognize め ら な か っ た こ と か ら, キ モ ト リ プ シ ン に し seaborne て specific anti 応 を shown す と exam え ら れ た. 5.HlChI <s:1> activity までにお pH2-11, temperature 70℃までにお までにお て release された. 6. HlChI は 8 m urea and び pH8.0 の 2% で temperature of 37 ℃ in the presence of SDS 24 time に お い て settle で あ っ た が, 2 - メ ル カ プ ト エ タ ノ ー ル で は active が に disappear completely し た. 7. RNA dry involved method で cropping し た HlChI ノ ッ ク ダ ウ ン マ ダ ニ で は, full blood insufficiency と weight loss が provoked さ れ, die out す る マ ダ ニ が confirm さ れ, and at the same time に し い laying low の が confirm さ れ た. More than 8. の grades よ り, HlChI は, high stability の キ モ ト リ プ シ ン specific イ ン ヒ ビ タ ー で あ り, マ ダ ニ vampire, digestive と reproduction の suppression に important な "を cut fruit た し て い る と exam え ら れ た.

项目成果

A novel chymotripsin inhibitor from the hard tick Haemaphysalis longicornis is involved in blood-feeding process

来自硬蜱 Haemaphysalis longicornis 的新型糜蛋白酶抑制剂参与血液喂养过程

• 发表时间: 2011
• 作者: M. Abdul Alim;Naotoshi Tsuji;Takeharu Miyoshi;M. Khyrul Islam;Takeshi Hatta;Kayoko Yamaji;Anisuzzaman;Kozo Fujisaki
• 通讯作者: Kozo Fujisaki

Legumains are critical for blood feeding and digestion, midgut cellular remodeling and reproduction in the ixodid tick Haemaphysalis longicornis

豆角蛋白对于长角血蜱的血液喂养和消化、中肠细胞重塑和繁殖至关重要

• 发表时间: 2010
• 作者: M.Abdul Alim;Naotoshi Tsuji;Takeharu Miyoshi;M.Khyrul Islam;Takeshi Hatta;Anisuzzaman;Kozo Fujisaki
• 通讯作者: Kozo Fujisaki