多細胞生物における細胞間の遺伝子発現のゆらぎとその制御に関する研究

多细胞生物细胞间基因表达波动及其调控研究

• 批准号: 09J01990
• 负责人: 落合 博
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01990/
• 关键词: zinc-finger nuclease; ZFN; ウニ; 標的遺伝子破壊; 遺伝子挿入; zinc finger nuclease; 遺伝子ターゲティング

本年度では,ウニ胚においてzinc-finger nuclease (ZFN)を利用した標的遺伝子座へのレポーター遺伝子挿入技術を確立し,内在遺伝子の発現を定量化することで,多細胞生物の発生過程における遺伝子発現のゆらぎに関する知見を得ることを目的として以下の通り研究を実施した。ZFNはDNA結合ドメインとヌクレーゼドメインからなる人工タンパク質で,任意のDNA塩基配列領域へDNA二重鎖切断(DSB)を導入できる。DSBは細胞内で速やかに修復されるが,外来のターゲティングベクターとDSB周辺領域で相同組換え修復が起こることで,レポーター遺伝子が特定遺伝子座へ効率的に導入されることが知られている。まずウニ胚で標的遺伝子座へのレポーター遺伝子挿入が可能かどうかを確かめるために,昨年度に確立したZFN作製技術を利用して,ウニEts遺伝子のストップコドン直前を標的とするZFNを作製した。Ets ZFN mRNAと,2A-H2B-GFP遺伝子とその両端に約1kbpのEts遺伝子座と相同な配列を含んだターゲティングドナー構築をウニ胚に導入したところ,ゲノミックPCRでEts遺伝子座へのレポーター遺伝子挿入が確認され,また蛍光顕微鏡観察からEts発現細胞のみでGFPが発現していることがわかった。これらのことから,Ets遺伝子座に挿入されたレポーター遺伝子は内在遺伝子プロモーターによって発現が調節され,GFP蛍光強度はEts遺伝子の発現量を反映することが示唆された。経時的な遺伝子発現動態を解析するために,Ets ZFN mRNAとターゲティングドナー構築を共導入した胚を共焦点レーザー顕微鏡で経時的に観察した。その結果,1個体内の細胞間で遺伝子発現動態のばらつきが認められた。このことから,ウニの発生過程において恥遺伝子の発現は細胞間でゆらいでいることが示唆された。

This year, zinc-finger nuclease (ZFN) has been used to make sure that the technology is in place, and the internal system has been used to quantify the results. Multi-cell biologics have been shown to be effective in the process of improving the quality of life. The combination of ZFN DNA and DNA double cut-off (DSB) data sets can be used in any DNA field. DSB is used to improve the speed of the cell, and to know that the rate of the specific constellation is higher than that of the same group in the DSB field. It is possible to make sure that the ZFN is used to make sure that the technology is used to make use of the technology, and that the Ets is used to make sure that the technology is used to make use of the technology. Ets ZFN mRNA, 2A-H2B-GFP, Ets, the same configuration contains the same configuration, which contains the following information: PCR, Ets, embryo, Ets, cell, cell, The light intensity of the GFP is reflected by the intensity of the light, the intensity of the light, the intensity of the Ets, the intensity of the light, the light intensity, the weight, the light intensity, the weight, the light intensity, the At that time, the status of the computer will be parsed, and the Ets ZFN mRNA will be able to monitor the microphone when it is in the common focus of the embryo. As a result, one of the intra-cellular enzymes in the body showed a state of health failure. If you don't want to go through the process, you will be able to detect an instigation of an intercellular electron microscope.

项目成果

Targeted mutagenesis in the sea urchin embryo using Zinc-finger nucleses

使用锌指核对海胆胚胎进行定向诱变

• 发表时间: 2010
• 作者: 落合博;藤田和将;鈴木賢一;西川正俊;柴田達夫;坂本尚昭;山本卓
• 通讯作者: 山本卓

Dicer is required for the normal development of sea urchin, Hemicentrotus pulcherrimus.

海胆 Hemicentrotus pulcherrimus 的正常发育需要 Dicer。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Zoological Science 27(6)
• 作者: Okamitsu Y;Yamamoto T;Fujii;T.;Ochiai;H.and Sakamoto;N.
• 通讯作者: N.

Suppressor of Hairless (Su(H)) is Required for Foregut Development in the Sea Urchin Embryo

海胆胚胎前肠发育需要无毛抑制剂 (Su(H))

• DOI: 10.2108/zsj.26.686
• 发表时间: 2009
• 期刊: The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society
• 作者: K. Karasawa;N. Sakamoto;Kazumasa Fujita;H. Ochiai;T. Fujii;K. Akasaka;Takashi Yamamoto
• 通讯作者: Takashi Yamamoto

Targeted mutagenesis in the sea urchin embryo using zinc-finger nucleases

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2010.01425.x
• 发表时间: 2010-08-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Ochiai, Hiroshi;Fujita, Kazumasa;Yamamoto, Takashi
• 通讯作者: Yamamoto, Takashi

Role of the nanos homolog druing sea urchin development

纳米同系物在海胆发育中的作用

• 发表时间: 2009
• 期刊: Developmental Dynamics 238
• 作者: 藤井孝吉、坂本尚昭、落合博;他5名
• 通讯作者: 他5名