Korrektur des genetischen Defektes mittels Zinkfingernukleasen (ZFN) bei der GM1-Gangliosidose des Alaskan Husky

特征基因umfängliche分子Untersuchungen der letzten Jahre haben gegedge， dass die Ursacheder gm1 - ganglisiddose bebem alaska Husky in iner 19bp复制内显子15 derkaninen sauren (- GLB1) lilight。在遗传方面，德国人认为，德国人的后代（-Galaktosidase-Aktivität）是纯合子。Ausgehend von diesen befundenbildet die hypothesis, dass eine Reparatur des mutierten gensmitels Zinkfingernukleasen (ZFN) induzierten DNA doppel - strangbrichen和homologerrekomination (DSB-HR) mit einer spezifischen DNA- matrize möglich ist， die Grundlage fr dievorgesehene研究。Während die meisten Ansätze zur Behandlung溶酶体speicherkrankheiten zur Zeit auf der Wiederherstellung des normalen Phänotyps durch einfinfgendes wildtype - gens beruhen， finden sich nur wenige studen, die eine Reparatur des defkten Gensanstreben。disese " klassischen " Wiederherstellungs-Therapieansätze weisen allerdings spezifischeNachteile wiz . b . ein abnormal expressionau, alatorisches einfgen des exogenen Genssowie die Notwendigkeit einer regelmäßigen Wiederholung der Therapie zur Aufrechterhaltung desWildtyp-Phänotyps auf。In diesem Zusammenhang stellt die Wiederherstellung des wildtype - gene - types（基因型），基因型（genditiung），创新基因型（genditiung）。研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：1 .研究结果表明：研究了犬成纤维细胞中多zistronische蛋白表达、ZFN蛋白与修复模板的关系，以及慢病毒蛋白载体在犬成纤维细胞中的表达。Um die Möglichkeiten einer Genreparatur imgesamtorganmus studieren zu können, sollen lentivirale Genvektoren in genetisch veränderteMäuse (Glb1-/-, Tg(anglb1mut)) eingefhrt werden, die das kanine mutierte Glb1- lealstransgen auf einem Glb1-defizienten (Glb1-/-) Hintergrund tragen。[2] [1] [1] [3] [1] [3] [3] [4] [3] [4] [4] [4] [4] [4]

Eigene umfängliche molekulare Untersuchungen der letzten Jahre haben gezeigt, dass die Ursacheder GM1-Gangliosidose beim Alaskan Husky in einer 19bp Duplikation innerhalb des Exon 15 derkaninen sauren (-Galaktosidase (GLB1) liegt. Dieser genetische Defekt hat eine dramatischeReduktion der sauren (-Galaktosidase-Aktivität bei homozygot kranken Tieren zur Folge.Ausgehend von diesen Befunden bildet die Hypothese, dass eine Reparatur des mutierten Gensmittels Zinkfingernukleasen (ZFN) induzierten DNA Doppel-Strangbrüchen und homologerRekombination (DSB-HR) mit einer spezifischen DNA-Matrize möglich ist, die Grundlage für dievorgesehene Studie. Während die meisten Ansätze zur Behandlung lysosomalerSpeicherkrankheiten zur Zeit auf der Wiederherstellung des normalen Phänotyps durch Einfügendes Wildtyp-Gens beruhen, finden sich nur wenige Studien, die eine Reparatur des defekten Gensanstreben. Diese „klassischen“ Wiederherstellungs-Therapieansätze weisen allerdings spezifischeNachteile wie z.B. ein abnormales Expressionsniveau, aleatorisches Einfügen des exogenen Genssowie die Notwendigkeit einer regelmäßigen Wiederholung der Therapie zur Aufrechterhaltung desWildtyp-Phänotyps auf. In diesem Zusammenhang stellt die Wiederherstellung des Wildtyp-Genotyps durch Geneditierung eine innovative dauerhafte Alternative dar. Es ist daher das Zieldieses Projektes, die Wiederherstellung des Wildtyp (-Galaktosidase-Gens in einem kaninenModell der GM1-Gangliosidose in vitro durchzuführen und die Validität dieses therapeutischenAnsatzes aufzuzeigen. Hierzu sollen polyzistronische Expressionsvektoren, die ZFN und repairtemplates beinhalten, mittels eines lentiviralen Vektors in kanine Fibroblasten eingeführt und diemutierte Gensequenz repariert werden. Um die Möglichkeiten einer Genreparatur imGesamtorganismus studieren zu können, sollen lentivirale Genvektoren in genetisch veränderteMäuse (Glb1-/-, Tg(canGLB1mut)) eingeführt werden, die das kanine mutierte Glb1mut Allel alsTransgen auf einem Glb1-defizienten (Glb1-/-) Hintergrund tragen. Die erfolgreiche Umsetzungdieses Versuchsvorhabens wird Wege für neue therapeutische Strategien zur Behandlung vonErbkrankheiten bei Mensch und Tier aufzeigen.