Charakterisierung einer Poly(A)-spezifischen 3`-Exoribonuklease und ihrer Rolle bei der Deadenylierung von mRNA

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Der Abbau des Poly(A)-Schwanzes der mRNA (Deadenylierung) ist der erste und geschwindigkeitsbestimmende Schritt im Abbau vieler mRNAs. Außerdem wird die Deadenylierung als Mittel der Translationskontrolle in der Oocytenreifung benutzt. Wir haben eine Poly(A)-spezifische 3'-Exoribonuklease gereinigt und kloniert, die möglicherweise für die Deadenylierung von mRNA in somatischen Zellen verantwortlich ist. ein homologes Enzym aus Xenopus katalysiert die Deadenylierung in Oocyten. Erstaunlicherweise bevorzugen diese 3'-Exoribonukleasen Substrate, die am 5'-Ende ein cap tragen. Hier werden Mittel beantragt, um zwei Ziele zu verfolgen. Erstens soll das Enzym in einem eukaryontischen System überproduziert werden, da das aus E. coli gewonnene Enzym sich in seinen Eigenschaften von denen des authentischen Enzyms unterscheidet. Zweitens soll eine Kartierung des Mausgens abgeschlossen werden. Mit Hilfe der dabei gewonnenen Inforamtion soll ein Plasmid zur Herstellung einer knock-out-Maus konstruiert werden.