新規骨特異的チャネル分子パネキシン3の骨形成における機能解析

新型骨特异性通道分子pannexin 3在骨形成中的功能分析

• 批准号: 21390427
• 负责人: 前田 真吾
• 金额: $ 7.65万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21390427/
• 关键词: 骨芽細胞分化; オステリクス; ヘミチャネル

平成21年度は、骨・軟骨におけるPannexin3の重要性を明らかにするために、培養骨芽細胞および骨・軟骨組織におけるPannexin3の発現を検討した。まず、培養骨芽細胞からmRNAを抽出し、RT-PCRにて遺伝子レベルでPannexin3が発現していることを確認した。さらに、蛋白レベルでPannexin3の発現を確認するために、2種類の特異的ペプチドをウサギに免疫し、抗Pannexin3抗体を作製した。作製した抗体および市販の抗Pannexin3抗体を用いてウエスタンブロッティングをおこなったところ、培養骨芽細胞において蛋白レベルでPannexin3が発現していることを確認できた。また、マウスのティッシュブロットによって、骨組織及び軟骨組織においてmRNAレベルでPannexin3が発現していることを明らかにした。次に、Pannexin3 KOマウスの解析に着手した。KOマウスのN1世代はレントゲン写真および骨格標本に明らかな表現型を認めなかった為、C57BL/6系統へのbackcrossを進めながら、レントゲン写真および骨格標本の解析を進めた。ところが、N5世代から出生直後に死亡するマウスが出始め、N8世代ではすべてのKOマウスが出生直後に死亡することがわかった。原因は明らかでないが、肋骨の異常による呼吸不全が考えられた。以上の結果から、Pannexin3が骨・軟骨組織において重要な働きを担っていることが示唆された。

The importance of Pannexin3 in bone and cartilage tissue culture was discussed in 2011. The expression of Pannexin3 was confirmed by RT-PCR and mRNA extraction from cultured bone bud cells. In addition, the detection of Pannexin3 was confirmed, and 2 kinds of specific Pannexin3 antibodies were produced The anti-Pannexin 3 antibody produced by the production of anti-Pannexin 3 antibodies was confirmed by the detection of Pannexin3 in cultured bone bud cells. Pannexin3 is found in bone and cartilage tissues. Next, Pannexin3 KO's start KO's N1 generation is the first generation to recognize the phenotype of the C57BL/6 system, and the second generation is the first generation to analyze the phenotype of the C57BL/6 system. The N5 generation is born and dies, and the N8 generation is born and dies. The reason is that the ribs are abnormal and the breathing is incomplete. The above results show that Pannexin3 is an important component of bone and cartilage tissue.