プロテアーゼ受容体PAR－2を軸としたイヌIBD病態の解明

阐明以蛋白酶受体 PAR-2 为中心的犬 IBD 病理学

• 批准号: 10J00914
• 负责人: 前田 真吾
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J00914/
• 关键词: イヌ; 炎症性腸疾患; PAR-2; プロテアーゼ; ケモカイン

本年度は、イヌIBDの慢性腸炎発症におけるPAR-2の役割を検討することを目的として研究を実施した。健常犬(n=25)およびIBD症例(n=40)の十二指腸粘膜を内視鏡下生検により採取し、リアルタイムPCRおよび免疫染色によりPAR-2遺伝子・蛋白発現を検討したところ、十二指腸粘膜におけるPAR-2遺伝子・蛋白発現の両方が、健常犬と比べIBD症例で増加していた。続いて、健常犬(n=25)およびIBD症例(n=40)から糞便を採取し、アゾカゼインアッセイによりセリンプロテアーゼ活性を測定したところ、健常犬と比較してIBD症例では有意に高く、さらに臨床症状の重症度と正の相関を認めた。以上の結果より、イヌIBD症例の腸管ではPAR-2とそのリガンドであるセリンプロテアーゼ活性の両方が増加していることが明らかになった。次に、健常犬(n=10)から採取した十二指腸粘膜をexvivoで培養し、これらの培養組織にトリプシンまたはPAR-2アゴニストをそれぞれ添加後、炎症性サイトカインおよびケモカイン遺伝子発現の変化をリアルタイムPCRにより検証した。また、トリプシンによるサイトカイン誘導効果がセリンプロテアーゼインヒビターにより阻害できるかをPMSFを用いて検証した。イヌ小腸組織にトリプシンまたはPAR-2アゴニストを添加することで、IL-1β、IL-8、MECおよびフラクタルカインの遺伝子発現が誘導された。このトリプシンによるサイトカイン誘導効果は、PMSFにより有意に減弱した。以上の結果より、セリンプロテアーゼ-PAR-2経路が炎症性サイトカイン・ケモカイン誘導を介してイヌIBDの発症に関与している可能性が示唆された。また、セリンプロテアーゼインヒビターにより、トリプシンによるサイトカイン誘導が阻害できたことから、イヌIBDの治療にプロテアーゼインヒビターが有用である可能性が示された。現在、メシル酸カモスタットというプロテアーゼインヒビターの経口薬を用いてイヌIBDの治験を進めており、一部の症例で効果があることを確認している。

This year, we will conduct research on PAR-2 in chronic enteritis. Endoscopic examination, PCR and immunostaining of PAR-2 gene and protein expression in duodenal mucosa of healthy dogs (n=25) and IBD patients (n=40) showed an increase in PAR-2 gene and protein expression in duodenal mucosa compared with IBD patients in healthy dogs. Feces were collected from healthy dogs (n=25) and IBD patients (n=40), and the activity of SLINPROTETA was measured in the healthy dogs. Therefore, the IBD patients were significantly higher compared with healthy dogs, and the correlation between the severity and severity of clinical symptoms was confirmed. The results showed that PAR-2 and PAR-2 increased in the intestinal tract of IBD patients. In addition, healthy dogs (n=10) were selected from duodenal mucosa exvivo culture, and cultured tissues from these dogs were examined for PAR-2 loss. The results of PMSF testing are as follows: The expression of PAR-2, IL-1β, IL-8, MEC and PAR-2 in small intestine tissue was induced by the addition of PAR-2, IL-8 and MEC. The effect of PMSF is intentionally weakened. The above results suggest that the PAR-2 pathway may be involved in the development of inflammatory disease. The possibility of preventing and treating IBD is demonstrated. Now, the treatment of IBD is in progress, and some cases are confirmed.

项目成果

炎症性腸疾患(リンパ球プラズマ細胞性腸炎)の病態

炎症性肠病（淋巴细胞性浆细胞性肠炎）的病理学

• 发表时间: 2013
• 作者: Maeda;S.;Ohno;K.;Nakamura;K.;Uchida;K.;Nakasima;K.;Fukushima;K.;Tsukamoto;A.;Goto-Koshino;Y.;Fujino;Y.;Tsujimoto;H.;前田真吾
• 通讯作者: 前田真吾

Molecular cloning and characterization of canine fractalkine its receptor CX3CR1

犬 fractalkine 受体 CX3CR1 的分子克隆及表征

• DOI: 10.1016/j.vetimm.2011.10.018
• 发表时间: 2012
• 期刊: Veterinary Immunology and Immunopathology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Maeda S.;Ohno;K.;Nakashima;K.;Fukushima;K.;Tsukamoto;A.;Suzuki;H.;Fujiwara;A.;Goto-Koshino;Y.;Fujino;Y.;Tsujimoto H.
• 通讯作者: Tsujimoto H.

犬の炎症性腸疾患におけるフラクタルカインおよびその受容体CX_3CR1の関与

fractalkine及其受体CX_3CR1在犬炎症性肠病中的作用

• 发表时间: 2012
• 作者: 前田真吾;大野耕一;中村賢治;中島亘;福島建次郎;藤野泰人;内田和幸;辻本元
• 通讯作者: 辻本元

Imbalance between IL-1 and IL-1 receptor antagonist gene expression in duodenal mucosa from dogs with inflammatory bowel disease

炎症性肠病犬十二指肠粘膜中IL-1和IL-1受体拮抗剂基因表达失衡

• 发表时间: 2011
• 作者: Maeda;S.;Ohno;K.;Nakasima;K.;Fukushima;K.;Tsukamoto;A.;Goto-Koshino;Y.;Fujino;Y.;Tsujimoto;H
• 通讯作者: H

Increased expression of fractalkine and its receptor CX3CR1 in canine inflammatory bowel disease and their possible role in recruitment of intraepithelial lymphocytes

• DOI: 10.1016/j.vetimm.2012.04.021
• 发表时间: 2012-08-15
• 期刊: VETERINARY IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY
• 影响因子: 1.8
• 作者: Maeda, Shingo;Ohno, Koichi;Tsujimoto, Hajime
• 通讯作者: Tsujimoto, Hajime