Mechanisms for ATP-dependent activation of highly-ordered complex formed by the initiator protein DnaA.

由起始蛋白 DnaA 形成的高度有序复合物的 ATP 依赖性激活机制。

• 批准号: 21770187
• 负责人: OZAKI Shogo
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21770187/
• 关键词: DnaA; 複製開始; 高次複合体; AAA+; 2重鎖DNA弛緩; DNA複製開始; 構造変化; 構造・活性相関

ATP-DnaA multimerize on the DnaA-assembly region (DAR) of the replication origin oriC, unwinding the duplex unwinding element (DUE) flanking DAR. The ATP-DnaA-oriC complex binds the resultant single-stranded (ss)DUE, promoting DnaB helicase loading. However, mechanisms in DUE unwinding remain unclear. Here, using various in vitro reconstituted systems, we identify functionally distinct DnaA sub-complexes formed on DAR and reveal their specific roles and novel mechanisms in DUE unwinding. The DUE-flanking left-half DAR carrying high-affinity DnaA box R1 and several ATP-DnaA-preferential sites formed a DnaA sub-complex competent to DUE unwinding and ssDUE binding, thereby supporting basal DnaB loading activity. This sub-complex is further subdivided to two ; The DUE-distal DnaA sub-complex formed on the ATP-DnaA-preferential sites binds ssDUE. The DUE-flanking DnaA sub-complex formed on DnaA box R1 recruits DUE to the DUE-distal DnaA sub-complex cooperatively with a DNA-bending protein IHF, promoting initiation. These dynamics in the initial complexes are likely conserved in eubacterial evolution.

ATP-DNAA在复制起源的DNAA组装区域（DAR）上进行了多层次，从而解开双链放松元素（应得的）DAR侧面。 ATP-DNAA-ROOD复合物结合了所得的单链（SS），从而促进DNAB解旋酶负荷。但是，应有的解放机制尚不清楚。在这里，使用各种体外重构系统，我们确定在DAR上形成的功能不同的DNAA子复合物，并揭示了其在适当放松的情况下的特定作用和新型机制。携带高亲和力DNAA Box R1和几个ATP-DNAA首选位点的左侧左右左右DAR形成了DNAA子复合物，既可以放松和SSDUE结合，从而支持了基础DNAB载荷活性。该子复合物进一步细分为两个。在ATP-DNAA首选位点形成的应得的DNAA子复合物结合了SSDUE。 DNAA Box R1募集中形成的应得的DNAA子复合物是由于到期DNAA亚复合物与DNA弯曲蛋白IHF合作的，从而促进了开始。初始配合物中的这些动力学可能在细菌进化中是保守的。

项目成果

DnaAによる2本鎖開裂を制御するための複製開始点の新規機能構造特性

复制起点的新功能结构特性控制 DnaA 的双链切割

• 发表时间: 2009
• 作者: 尾崎省吾;ほか
• 通讯作者: ほか

ヒストン様蛋白質による複製開始促進因子DARS2(DnaA-reactivatingsequence2)の制御様式の解明

阐明组蛋白样蛋白对复制起始启动子 DARS2（DnaA 重激活序列 2）的调节

• 发表时间: 2010
• 作者: 加生和寿;藤光和之;尾崎省吾;毛谷村賢司;片山勉
• 通讯作者: 片山勉

高次複合体形成による大腸菌染色体の複製開始因子DnaAの機能制御

高阶复合物形成对大肠杆菌染色体复制起始因子 DnaA 的功能控制

• 发表时间: 2010
• 作者: 片山勉;藤光和之;尾崎省吾;加生和寿
• 通讯作者: 加生和寿

ヒストン様蛋白質による複製開始促進因子DARS2(DnaA-reactivating sequence 2)の制御様式の解明

阐明组蛋白样蛋白对复制起始促进因子 DARS2（DnaA 重激活序列 2）的调节模式

• 发表时间: 2010
• 作者: 加生和寿;ら
• 通讯作者: ら

Mechanism for ATP-DnaA-dependent unwinding of duplex DNA within the chromosomal replication origin.

染色体复制起点内双链 DNA 依赖 ATP-DnaA 解旋的机制。

• 发表时间: 2010
• 作者: Ozaki;S .;Katayama;T.
• 通讯作者: T.