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レシオ変化型亜鉛蛍光プローブの開発

可变比率锌荧光探针的研制

基本信息

批准号：
10F00338
负责人：
菊地和也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、タンパク質に結合していない遊離の亜鉛イオンが中枢神経機能や免疫機能に関わっていることが示唆されており、亜鉛イオンの生理機能に関して大きな注目が集められている。今日、細胞内における遊離亜鉛イオン濃度の変化を正確に捉えることのできる実用的技術として蛍光レシオプローブの開発が求められている。前年度までに、開発したプローブは、亜鉛イオンの結合に伴い、蛍光レシオの変化が観測されたものの、プローブの蛍光波長のシフトが小さいことと、亜鉛イオン以外の金属イオンとも結合することが問題であった。本年度では、これらの問題を解決することを目的として、亜鉛イオンとの配位に関わる部位(キレーター)の構造を改変したプローブの設計を行った。キレーターの構造を変えることで金属イオンに対する親和性・選択性を変化させるだけではなく、キレーター周辺に存在するヒドロキシル基のpKaを変化させ蛍光波長のシフトを増大させると期待した。新規の亜鉛イオンキレーターとしては、N,N-dipicolylethylenediamineを選択した。これと同時に、生細胞イメージングを目的として、蛍光波長を長波長化させるために、クマリン骨格にベンゾチアゾール環を導入したプローブを設計した。その結果、亜鉛イオンとの結合に伴い励起波長のブルーシフトが観測され、レシオイメージングが可能であることが判明し、亜鉛イオンに対する選択性が向上していた。亜鉛イオンとイオノフォアを細胞に添加することで、細胞内に亜鉛イオンを導入し、異なる二波長(380nm/450m)で励起し蛍光レシオイメージングを行った。その結果、亜鉛イオンの細胞内流入に従い、蛍光レシオが変化したことから、このプローブを用いて細胞内亜鉛イオンを検出することができたといえる。

In recent years, we have been able to use the immune mechanism to express and abet the disease in recent years. In recent years, we have been able to use the immune machine to express and abet the physiological mechanism of the disease. Today, the intracellular monitoring system is making sure that the technology used in the system is used to improve the performance of the system. In the previous year, it was concluded that the temperature of the previous year, the temperature of the metal, the temperature and the temperature of the metal in the previous year were combined with the companion, the optical wave length, the optical wave length, and the temperature of the metal. This year, we will solve the problem of health care. The purpose of this year is to improve the performance of the coordination system. In order to improve the quality of the metal, there are significant differences in the optical properties of the metal, the temperature, the wavelength, the In the new regulations, please select the new rules, such as NMET dipicolylethylenediamine and so on. At the same time, the temperature of the cell is sensitive, the wavelength of light is long-term, the wavelength of light is long-term, the temperature is high, and the environment is in the design of the environment. The result of the experiment, the combination of the wave length and the frequency of the wave, the results, the results and the results. In this way, we need to add a sensitive cell, an intracellular phosphor, and a second wave length (380nm/450m) to stimulate the growth of the cell. The results show that the inflow of cells into the cell, the flow of light into the cell, the flow of cells into the cell, the flow of light, the flow of light, the flow of blood into the cell.