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トキソプラズマ原虫の発育ステージ変換機構の解明と新規ワクチンの開発

弓形虫发育阶段转换机制的阐明及新疫苗的研制

基本信息

批准号：
10F00110
负责人：
西川義文
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、人獣共通感染症の原因原虫でもあるトキソプラズマ原虫の宿主体内における発育ステージ(急性感染期のタキゾイト→慢性感染期のブラディゾイト)変換機構の解明と新規弱毒ワクチン開発を目指して企画した。本年度に実施した研究内容と得られた研究成果は以下の通りである。タキゾイトとブラディゾイト虫体ESTデータベースによる各遺伝子の転写レベルの比較を行ったところ、多くのステージ特異的転写遺伝子の存在が確認された。その中で、虫体のレドクスシステム(酸化還元系)の関連酵素-グリオキサラーゼI(メチルグリオキサール(MG)とグルタチオン(GSH)からS-D-ラクトイルグルタチオンを生成させる酵素)遺伝子のクローニングと解析を行った。グリオキサラーゼI(TgGlo1)遺伝子は、1,008-bpのORFよりなり、推定タンパク質の分子量は38.5-kDaであった。TgGlo1の機能ドメインフラグメントを大腸菌にて発現し、組換えタンパク質に対する免疫血清を作製した。この抗血清を用いたイムノブロット法により、38.5-kDaの虫体由来TgGlo1タンパク質が同定できた。また、組換えTgGlo1の酵素活性も確認された。TgGlo1の機能ドメインの二つのアミノ酸残基(E166、R188)が酵素活性に必須であることも確認された。この酵素活性はグリオキサラーゼのインヒビターであるcurcuminにより特異的に抑制された。また、curcuminは試験管培養においてトキソプラズマ原虫の増殖を顕著に抑制した。さらに、マウスモデルにおける治療試験においても一部治療効果が認められた。今後、TgGlo1の虫体発育ステージへの関与の解明が待たれる。

This study is aimed at clarifying the mechanism for the development of protozoa in the host (acute infection stage → chronic infection stage) and the development of new attenuated protozoa. This year's research results are as follows: The existence of the unique gene is confirmed by comparing the gene expression of each gene with the gene expression of each gene. In the middle of the process, the enzyme related to the transformation of the insect body (acidification reduction element system)-the transformation of the insect body (MG)-the transformation of the insect body (MG). The molecular weight of the putative protein is 38.5-kDa. TgGlo1 functions as an immune serum for E. coli detection, composition and quality control. This antiserum was used to detect the origin of the 38.5-kDa parasite. The enzyme activity of TgGlo1 was confirmed. The two amino acid residues (E166, R188) of TgGlo1 are required for enzyme activity. The enzyme activity is regulated by curcumin. Curcumin test tube culture The treatment of the disease is very effective. In the future, the relationship between TgGlo1 and insect development is pending.