ネオスポラ原虫の垂直感染関連因子の同定とワクチン及び診断システムへの応用

新孢子虫原虫垂直感染相关因素的鉴定及其在疫苗和诊断系统中的应用

• 批准号: 18880003
• 负责人: 西川 義文
• 金额: $ 1.67万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18880003/
• 关键词: 感染症; 獣医学; 蛋白質; プロテオーム; 免疫学; 原虫; ネオスポラ; 流産

1.牛血清のサンプリングネオスポラ原虫抗体陽性牛のうち、流産あるいは異常産を起こした母牛および正常な出産をした母牛の血清サンプリングを実施した。当初、山形県家畜保健衛生所を介したサンプリングを予定していたがサンプル数の確保が困難だったため、宗谷家畜衛生保健所よりサンプルを確保した。2.原虫由来タンパク質と組換えタンパク質の回収プロテオームマップの作成およびELISA法の抗原に用いるために、分離精製したネオスポラ原虫NC-1株(犬から分離した世界的標準株)から可溶性タンパク質を調整した。またELISA法に用いる原虫由来組換えタンパク質として、大腸菌発現系によるNcSAG1,NcSRS2,NcGRA7の生産・精製方法を確立した。3.原虫由来組換えタンパク質を用いたELISAによる牛血清のスクリーニング上記組換えタンパク質を抗原としたELISA法により牛血清のスクリーニングを実施したところ、ネオスポラ陽性で正常出産した群と比較して、ネオスポラが感染し流産を起こした個体において抗NcGRA7抗体の上昇が確認できた。4.二次元電気泳動による虫体分泌タンパク質のマッピング回収した原虫タンパク質液を二次元電気泳動にて展開した後にタンパク質染色(クマシー染色・銀染色など)を行い、さらに画像解析を行うことでプロテオームマップを作成した。5.各分泌タンパク質のMALDI-TOF-MS分析回収した原虫タンパク質液を二次元電気泳動にて展開した後に、スクリーニングした牛血清を用いたイムノブロッテイングを行い、流産あるいは異常産を起こした母牛および正常な出産をした母牛の血清が認識する原虫由来分子を比較検証することを予定している。

1. Bovine serum production is positive for protozoan antibodies, abortion is abnormal, and normal cow production is carried out. At the beginning, it was difficult to ensure the number of services provided by the Yamagata Prefecture Livestock Health Center, but it was difficult to ensure the number of services provided by the Sogaya Livestock Health Center. 2. Protozoan origin, quality, composition, quality, recovery, preparation, ELISA antigen, isolation, purification, reproduction, protozoan NC-1 strain (dog isolation, world standard strain), soluble, quality adjustment The ELISA method was used to establish the production and purification methods of NcSAG1, NcSRS2 and NcGRA7 from protozoan origin group and Escherichia coli development system. 3. The origin of protozoa was determined by ELISA, and the increase of anti-NcGRA7 antibody in bovine serum was confirmed by ELISA. 4. 2-D Electrophoresis: Secretion of the parasite from the cytoplasm, development of the parasite from the cytoplasm. 5. MALDI-TOF-MS analysis of each secretory substance was carried out to compare the protozoan origin molecules of the protozoan with those of the bovine serum after the development of two-dimensional electromigration.

项目成果

Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant p23 for the detection of antibodies to Cryptosporidium parvum in cattle.

使用重组 p23 检测牛隐孢子虫抗体的酶联免疫吸附测定的开发和评估。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Protozool. Res. 16・1-2
• 作者: Bannai.H.;Nishikawa;Y.;Seo;J.;Nakamura;C.;zhang;S.;Kimata;I.;Takashima;Y.;Li;J.;Igarashi;I.;Xuan;X
• 通讯作者: X

A 38-kDa protein from Babesia gibsoni and its antibody response in an experimentally infected dog.

来自吉氏巴贝虫的 38 kDa 蛋白质及其在实验感染狗中的抗体反应。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Vet. Parasitol. 141・3-4
• 作者: Zhou J;Zhang G;Nishikawa Y;Fujisaki K;Xuan X.
• 通讯作者: Xuan X.

Development of an immunochromatographic test with recombinant BgSA1 for the diagnosis of Babesia gibsoni infection in dogs

• DOI: 10.1007/s00436-006-0392-8
• 发表时间: 2007-05-01
• 期刊: PARASITOLOGY RESEARCH
• 影响因子: 2
• 作者: Jia, Honglin;Liao, Min;Xuan, Xuenan
• 通讯作者: Xuan, Xuenan

Identification of ribosomal phosphoprotein P0 of Neospora caninim as a potential common vaccine candidate for the control of both neosporosis and toxoplasmosis

鉴定犬新孢子虫核糖体磷蛋白 P0 作为控制新孢子虫病和弓形体病的潜在通用候选疫苗

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol. Biochem. Parasitol. 153
• 作者: Zhang;H.;Lee;E. G.;Liao;M.;Comaore;M.;Zhang;G.;Kawase;O.;Fujisaki;K.;Sugimoto;C.;Nishikawa;Y.;Xuan;X.
• 通讯作者: X.

Apical membrane antigen 1 is a cross-reactive antigen between Neospora caninum and Toxoplasma gondii, and anti-NcAMA1 antibody inhibit host cell invasion by both parasites

顶膜抗原 1 是犬新孢子虫和弓形虫之间的交叉反应抗原，抗 NcAMA1 抗体可抑制两种寄生虫对宿主细胞的侵袭

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol. Biochem. Paarasitol. 151
• 作者: Zhang;H.;Compaore;M.;Lee;E. G.;Liao;M.;Zhang;G.;Sugimoto;C.;Nishikawa;Y;Xuan;X.
• 通讯作者: X.