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抗HIV薬の創製を目指した関連蛋白質の酵素反応の実時間モニタリングと構造解析

相关蛋白质酶促反应的实时监测和结构分析，旨在创造抗艾滋病毒药物

基本信息

批准号：
10J01375
负责人：
古川亜矢子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

HIV感染の拡大を防ぐには、従来のHIV自身を標的とした薬剤の開発だけでは不十分で、変異しにくい宿主側因子及び宿主因子-HIV間相互作用を薬剤の標的にすることが求められている。ヒトが保持するAPOBEC3Gタンパク質(A3G)は、HIVの粒子内へ取り込まれた後、宿主細胞内で逆転写されて生じたHIVの(-)DNA上のシトシンをデアミネーションしてウラシルへと変換する活性によって、抗HIV活性を発揮する。しかし、数多く連続するシトシンの区別やHIVのゲノムDNA上に散在するCクラスター内でのA3Gの作用機序は不明であった。そこで我々は、デアミネーション反応のリアルタイムモニタリングにより、A3Gの動的な作用機序の解明に取り組んだ。この手法を用いて、様々なssDNAのデアミネーション反応を解析した。その結果、A3Gは、CCCの3番目のCを好んでデアミネーションすること、このCCCのクラスターがDNA上に複数個存在する場合、より上流(5'側)にあるクラスターのCを優先的にデアミネーションすることを明らかにした。次にA3Gが5'側のCクラスターを優先的にデアミネーションする機構を明らかにするために、リアルタイムNMRデータの速度論的解析を行った。私達は、A3Gはブラウン運動でssDNA上を前後にスライドするが、Cに入る向きが3'からまたは5'からによって酵素活性が異なるというモデルを構築した。このモデルから導いた式に、測定した数種類のNMRデータをフィッティングした結果、3'からCに入った時の酵素活性は、5'から入った時の酵素活性よりも5倍高いことが明らかになった。すなわち、A3Gが3'から通る頻度の多い上流(5')の方が、デアミネーションされる確率が高くなるため、A3Gは位置依存的な反応速度を示すと言える。A3Gの基質はHIVの(-)ssDNAであるが、dsDNAを合成するHIVの逆転写酵素と競合しなければならない。そのため、効率良くHIVのゲノム上に変異を導入するためにA3Gはこのような方向性を持ったデアミネーション反応機構を獲得したと考えられる。

HIV infection is very important for the prevention and treatment of severe acute respiratory syndrome (HIV). It is necessary to detect the interaction between host factor and host factor-HIV, and to detect the interaction between host factor and host factor. After the intra-particle extraction of A3G (A3G) and APOBEC3G (A3G), the intracellular DNA of the host was inversely written on the HIV (-) DNA. The anti-HIV activity was detected by anti-HIV activity. In different areas of the HIV network, there is a lot of information on the DNA. The sequence of the A3G action mechanism is unknown. We need to know the sequence of the operation mechanism of the A3G operation. The gimmick uses the word "ssDNA" and "counter-parsing". The results of the test, A3G, CCC, and so on, do not change the number of copies of the DNA that exist on the DNA, and the number of copies that exist on the DNA. For the second time, the A3G system in the first place has a clear understanding of the analysis of the speed theory of the A3G system and the NMR system. Before and after the launch of the ssDNA, the A3G communication system and the A3G communication system are responsible for the monitoring of the activity of the enzyme in the first place. The results showed that the enzyme activity was 5 times higher than that of 3', 5', 5', 5', 5', 5', 3', 3', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5', 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5. The location-dependent speed of A3G, A3G and A3G. A3G HIV (-) ssDNA synthesis, HIV synthesis, reverse enzyme synthesis, enzyme synthesis, enzyme synthesis. In order to improve the performance and efficiency of the HIV system, the direction of the A3G system has been improved. The direction of the system has been improved.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Heat Shock Protein 70 Inhibits HIV-1 Vif-mediated Ubiquitination and Degradation of APOBEC3G*

DOI：
10.1074/jbc.m110.166108
发表时间：
2011-01
期刊：
The Journal of Biological Chemistry
影响因子：
0
作者：
Ryuichi Sugiyama;H. Nishitsuji;A. Furukawa;M. Katahira;Y. Habu;H. Takeuchi;A. Ryo;H. Takaku
通讯作者：
Ryuichi Sugiyama;H. Nishitsuji;A. Furukawa;M. Katahira;Y. Habu;H. Takeuchi;A. Ryo;H. Takaku

NMR study of XMRV protease in complex with an inhibitor

XMRV 蛋白酶与抑制剂复合物的 NMR 研究

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
H.Okamura;T.Matsunaga;A.Furukawa;Y.Sato;R.Iwaoka T.Nagata;N.Kobayashi;A.Takaori;R.Morishita;A.Ryo;M.Katahira
通讯作者：
M.Katahira

The real-time monitoringof the enzymatic reaction of an anti-HIV factor APOBEC3G

抗HIV因子APOBEC3G酶促反应的实时监测