胃癌におけるProx1ホメオボックス転写因子とCOUP-TFII核内受容体の役割

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胃癌におけるProx1とCOUP-TFIIの機能解析のため、OCUM-2MD3、OCUM-2MLN、MKN7、28、45細胞を用いて両者の発現を調べ、MKN28-COUP-TFIIノックダウン株を樹立し、細胞運動能および足場非依存的増殖が亢進することを示した。しかしこの細胞株をヌードマウスに移植しても腫瘍増殖に有意な差は生じなかった。このCOUP-TFIIの機能の違いが実験系によるものなのか、それとも別の原因によるものなのかを考察し、COUP-TFIIはデータベース上にsplicing variantが報告されており、full lengthをCOUP-TFIIとすると、variantについては未解明であることがわかった。そこでvariantの機能とその作用機序を検討した。まずvariantが各種細胞で発現し、構造上DNA結合を欠いているため、DNA結合能がないことを明らかにした。またCOUP-TFIIはホモダイマーを形成することが知られているが、variantはCOUP・TFIIとヘテロダイマーを形成しCOUP-TFIIのDNA結合を抑制することを示した。さらにCOUP・TFIIおよびvariantの欠損変異体を作製することで、両者の結合部位を明らかにし、内因性の結合も示した。COUP-TFIIはHepG2細胞においてCyp7a1遺伝子の転写を活性化すること報告されているが、variantはこのCOUP-TFIIによるCyp7a1の転写活性化を抑制することを示した。また、variantはCOUP-TFI-がCyp7a1プロモーターに結合することを阻害し、variantの発現により細胞内での内因性のCyp7a1遺伝子の発現も低下することを示した。以上の結果から、variantはCOUP-TFIIとの結合を介してCOUP-TFIIの作用に抑制的に機能している可能性が示唆された。