RNAi依存的ヘテロクロマチンの制御因子としてのメディエーターの解析

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分裂酵母のセントロメア周縁部のヘテロクロマチンはRNAi(RNA interference)依存的に形成される。このヘテロクロマチン化とsiRNA(small interfering RNA)の生産はRNAポリメラーゼII(RNAPII)による転写と共役して起こると考えられている。そこで我々は、RNAPIIと相互作用する因子の中にRNAi経路で働くものがあると推測した。興味深いことに、メディエーター複合体のサブユニットPmc6をコードする遺伝子破壊株において、セントロメア周縁部のサイレンシングが脱抑制されることがわかった。メディエーターは、細胞内外の刺激やプロモーター特異的な環境をRNAPIIに伝える仲介因子として知られている。Δpmc6変異株では、セントロメア周縁部において、ヘテロクロマチンマークであるヒストンH3K9メチル化、およびSwi6(HP1ホモログ)の局在が減少していることがわかり、他のヘテロクロマチンには影響を及ぼさないことから、Pmc6はRNAi経路で機能することが示唆された。また、Δpmc6変異株はRNAi因子変異と同様に、細胞内にセントロメア周縁部ヘテロクロマチン領域由来のnon-coding RNA(ncRNA)を蓄積し、siRNAの合成不能が見られた。RNAi因子変異とΔpmc6との二重変異株を用いた更なる解析により、Pmc6はヘテロクロマチンにおけるncRNAの転写反応のみならず、その後のプロセシングにも関与していることが示唆された。さらに、メディエーターは、細胞周期依存的にRNAPIIと共にセントロメア周縁部ヘテロクロマチンに局在することが明らかになった。これらの結果は、メディエーターがRNAPIIと協調的に働き、セントロメア周縁部ヘテロクロマチンにおける転写と、RNAi経路での転写産物のプロセシングを共役する可能性を強く示唆している。