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がん抑制性細胞接着分子CADM1のγセクレターゼ切断による機能調節

γ-分泌酶裂解对肿瘤抑制细胞粘附分子CADM1的功能调节

基本信息

批准号：
10J10138
负责人：
長柄雄介
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10138/
关键词：
癌抑制遺伝子 CADM1 γセクレターゼ ADAM10 shedding プロテオリシス

项目摘要

γ切断によって産生されるCADM1細胞内ドメイン(ICD)の細胞内局在を明らかにするため、生化学的分画法を用いた検討を行った。これにより、ICDの一部は核にも局在することを明らかにした。これは、ICDが転写調節に寄与するというストーリーと矛盾しない。これに加えて、クローニングしたICD断片をNIH3T3細胞に強制発現させて免疫染色も行ったが、こちらでは明確な局在が観察できなかった。CADM1誘導性の細胞死がCADM1-ICDの産生を介して起こる可能性を考え、この仮説を検討するため、ICDまたは全長CADM1をCOS-7細胞に強制発現し、トリパンブルー法を用いて細胞死の変化を観察した。その結果、全長CADM1導入細胞では細胞死の増加が観察されたが、ICD導入細胞はベクター導入細胞に比べて細胞死は増加しなかった。ICDの産生は、CADM1の分解機構のひとつではあるが、細胞死の誘導を媒介するものではないと考えられた。リソソームプロテアーゼ阻害剤であるE-64で細胞を処理し、全長CADM1および2種類の細胞質側shedding断片量を評価した。その結果、全長CADM1、α切断産物、β切断産物全てが蓄積した。この結果から、リソソーム酵素が全長CADM1と両shedding産物の分解を担っていることが明らかになった。これまでの結果をまとめ、論文を執筆し、学術誌に投稿した。執筆全体に加え、投稿の処理のほぼ全てを自分で行い、論文投稿の全ての流れを把握した。

CADM1 is a cellular organ that is involved in the production of γ-cut enzymes. A part of the ICD is a part of the ICD. This is a contradiction in terms of ICD regulation. In addition, the ICD fragments were detected by immunostaining in NIH 3T3 cells. CADM1-induced cell death is a potential cause of death in COS-7 cells. As a result, the cell death rate of full-length CADM1-introduced cells increased, while that of ICD-introduced cells increased. ICD generation, CADM1 decomposition mechanism, cell death induction, media, etc. E-64 cells were processed and the amount of cytoplasmic shedding fragments of full-length CADM1 and 2 species was evaluated. The results showed that full-length CADM1, α-cleavage product and β-cleavage product were accumulated. The result is that the enzyme is responsible for the decomposition of full-length CADM1 and shedding products. The results of this paper are published in the journal. The author of the whole article, the author of the article, the author of the article, the article, the author of the article, the author of the article, the article, the author of the article, the author of the article, the article, the author of the article, the author of the article, the article, the author of