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緑色蛍光タンパク質付加ノロウイルス様粒子の新規合成

添加绿色荧光蛋白的诺如病毒样颗粒的新合成

基本信息

批准号：
21656131
负责人：
大村達夫
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイルスによる感染性胃腸炎を起こす主要な原因としてノロウイルスが挙げられる。ノロウイルスは培養細胞で増やす方法が見つかっておらず,ウイルスの感染機構,複製機構など基礎的な研究が遅れている。本研究ではバキュロウイルス-昆虫細胞発現系を用いてノロウイルス様中空粒子(NoVLP)に緑色蛍光タンパク質GFPを付加したウイルス様粒子NoVLP-GFPを合成することを目指す。NoVLP-GFPはノロウイルスと物理化学的特性が類似しているが感染性がなく,GFPによる緑色蛍光によりその検出が容易であるという特徴を持つ。NoVLP-GFPの合成に重要な,バキュロウイルスに組み込むノロウイルス由来タンパク質遺伝子およびGFP遺伝子の組み合わせ,及び昆虫細胞1個あたりに感染させるバキュロウイルスの量(multiplicity of infection:MOI)について検討した結果,ノロウイルス遺伝子のORF2とGFP遺伝子とノロウイルス遺伝子のORF3を合成した遺伝子GFP-ORF3を組み合わせ,昆虫細胞に同時感染させることでもっとも効率よくNoVLPが合成されることを確認した。また,MOIの検討を行った結果,ORF2とGFP-ORF3のMOIがそれぞれ2・1,3・3とした2条件が良いことが確認できた。さらにこの合成条件ではTEMによりNoVLPが,トランスイルミネータによりGFPの緑色蛍光が確認された。したがって,本手法によりNoVLP-GFPの合成に成功したことが示唆された。

The main cause of infectious gastroenteritis is infection. The method of cell culture is used to investigate the infection mechanism, replication mechanism and basic research. In this study, the synthesis of hollow particles (NoVLP), green fluorescent particles (GFP), and NoVLP-GFP was studied. NoVLP-GFP has similar physicochemical properties and infectivity, while GFP has green fluorescence and easy detection. The synthesis of NoVLP-GFP is important, and the combination of NoVLP and GFP genes is important, and the multiplication of infection (MOI) in insect cells is confirmed. The combination of NoVLP and GFP genes is important, and the combination of NoVLP and GFP genes is important. The MOI of ORF 2 and GFP-ORF3 is confirmed by the MOI of ORF2 and GFP-ORF3. This synthesis condition is confirmed by TEM and GFP. This method was successful in the synthesis of NoVLP-GFP.