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タンパク質立体構造情報に基づく発光プローブの開発

基于蛋白质三维结构信息的发光探针的研制

基本信息

批准号：
19021046
负责人：
小澤岳昌
金额：
$ 3.33万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19021046/
关键词：
可視化分析化学生体分子バイオテクノロジー

项目摘要

個々の生体分子の細胞内や動物個体内での「構造・機能・動態」を詳細に解明することは, 現在の生命科学研究において最も重要な課題である. 本研究は, (1)タンパク質のリン酸化, (2)ペプチド切断酵素活性を, 低侵襲的に可視化するための新たなプローブ分子の開発原理を創案し, 実際に生きた動物個体内で可視化できることを目的とした.(1)緑色を発するElucN-14-3-3/Bad-McLuc1プローブを開発し、内在性コントロールとして赤色光を発する鉄道虫由来の赤色ルシフェラーゼ(SLRLuc)を細胞に発現させ, 同一の発光基質D-Luciferinを用いたマルチカラーイメージングを行った. 2種類のバンドパスフィルターを利用したマウスイメージングシステムを組み上げ, Bad-14-3-3間相互作用を半定量的に評価することに成功した. ElucとSLRLucは、マウス個体における二色発光イメージングに有用なツールとして利用できることを実証した.(2)本年度は環状Flucが, 生きたマウス体内のカスパーゼ-3活性の検出に応用可能であるか、さらなる検証を実施した. 環状Flucを発現するHeLa細胞をマウス背中の右側に移植した. マウスにSTS(100μg/kg体重)を腹腔内(i.p.)注射した場合に行ったところ, コントロールに対し有意な増加が見られた. 環状Flucを用いた発光イメージング法は,カスパーゼ活性をリアルタイムで高感度検出できることを実証した.

A detailed explanation of the structure, function and dynamics of living molecules in cells and animals is now one of the most important topics in life science research. This study aims at: (1) visualizing the enzyme activity and low invasion;(2) visualizing the development of novel molecules in living animals. (1)Green light development ElucN-14-3-3/Bad-McLuc1 light development, intrinsic light development, red light development, red light development, cell development, the same light matrix D-Luciferin light development. 2. Semi-quantitative evaluation of the Bad-14-3 interaction was carried out successfully. Eluc (2)This year, cyclic Fluc was produced and tested for activity in vivo. HeLa cells were found in circular Fluc cells and transplanted to the right side of the cell. STS(100μg/kg body weight) intraperitoneal (i.p.) Injections are often made in the absence of a clear intention. The ring Fluc is used for high sensitivity detection.