サイクロフィリンD抑制による幹細胞由来心筋分化誘導促進機構の解明とその臨床応用

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はじめにヒトiPS細胞からの心筋分化誘導法の安定化を目指してルーチンかつ大量に心筋細胞の分化誘導を行い、継続している。このヒトiPS細胞由来心筋細胞の大量安定供給の中で得られた拍動心筋細胞を用いて、その形態および機能解析を行った。また、安定した分化誘導環境の中で、種々の薬剤添加試験を行い、その分化誘導に及ぼす影響について比較検討を行った。心筋細胞の安定した分化誘導が行える環境を整えた上で、サイクロスポリンによる心筋分化誘導増幅効果を再現した。次に、ヒトiPS細胞の内因性のサイクロフィリンDに対して、ノックダウン操作を加えるべく実験を行った。まず、ヒトサイクロフィリンDに対するRNA干渉技術を用いた抑制を行うべく、3つの遺伝子配列を選択し、それぞれに対するshRNAを作製。この3つの候補を用いてヒトサイクロフィリンD抑制効果を検討したところ2つのshRNA配列で非常に強力なヒト細胞におけるサイクロフィリンD抑制効果が得られることが分かり、このうちの一つのshRNAを組み込んだレンチウィルスベクターの作製を現在行っており、完成間近な段階である。shRNAを組み込んだレンチウィルスベクターが完成した暁には、未分化ヒトiPS細胞への導入を行い、これにより内因性のサイクロフィリンD抑制ヒトiPS細胞株を作製し、ルーチンの心筋分化誘導システムに乗せて、心筋細胞分化誘導実験を行い、ヒトiPS細胞内の内因性サイクロフィリンD抑制の心筋細胞分化過程に及ぼす影響を検討する予定であるが、現在殘念ながらその直前段階までの進捗状況である。これは、ヒトiPS細胞の維持管理および分化誘導実験においてその安定性および分化効率が実験毎に変動する不安定な基礎によっている為であり、この部分を安定化させるために想定以上の時間を要したが、当初の実験目的の主体である、内因性サイキロフィリンD抑制ヒトiPS細胞の作製段階まで、こぎ着けることができた。(782文字)