ライブイメージング法の確立による皮膚樹状細胞の時空間的動態と機能制御機構の解明

通过建立实时成像方法阐明皮肤树突状细胞的时空动力学和功能控制机制

基本信息

批准号：
21659266
负责人：
椛島健治
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659266/
关键词：
皮膚免疫樹状細胞ライブイメージング

项目摘要

免疫機構の特徴は多数の免疫細胞が体内を移動し、相互作用し合うことによって誘導される複雑な動的システムである。したがって、免疫応答誘導プロセスにおいて皮膚免疫担当細胞の相互作用は必須であり、これらがどのように時空間的になされているかを検証する方法の導入が今後の皮膚免疫学の発展において重要課題である。近年、二光子励起顕微鏡によるリアルタイムイメージングの技術進歩が進みつつある。二光子励起は、光毒性を抑えて長時間の経時的観察が可能であるため、従来の共焦点顕微鏡に比して、組織深部の個々の細胞を「生きたまま」リアルタイムに高空間分解能で観察することが可能となる。そこで申請者は、上記の科学技術を皮膚に応用し、皮膚免疫細胞のリアルタイムイメージングを用いて免疫制御細胞の時空間的動態と機能制御機構を解明するため、二光子励起顕微鏡により生体組織イメージング用に改変して皮膚臓器使用可能条件を探った。骨髄由来樹状細胞をCFSEで蛍光ラベルしたものをマウスfootpadに皮内投与した後に、所属リンパ節での樹状細胞のライブイメージングに成功し、リンパ節における皮膚樹状細胞の輸入管からリンパ節への移入やリンパ節の動態の解析を行うことに成功した。さらに、皮膚のライブイメージングをマウスに麻酔をかけて行うことに成功し、生きたまま樹状細胞の皮膚免疫応答時における時空間的動態制御の解明をする系を確立した。

免疫机制的特征在于整个体内许多免疫细胞的迁移和相互作用引起的复杂动态系统。因此，皮肤免疫能力细胞之间的相互作用在诱导免疫反应过程中至关重要，并且引入了验证这些方法是如何进行时空的方法，这是皮肤免疫学未来发展的重要问题。近年来，使用两光子激发显微镜实时成像的技术进步一直在进步。两光子激发可降低光毒性并随着时间的推移而长期观察，从而可以观察到实时的组织中深处的单个细胞，而与常规共聚焦显微镜相比，空间分辨率很高。因此，申请人使用皮肤免疫细胞的实时成像将上述科学和技术应用于皮肤，并阐明免疫调节细胞的时空动力学和功能控制机制，申请人将其修改为使用两次激发显微镜进行生物组织成像的IT，以探索用于探索肤色的条件。在对骨髓衍生的树突状细胞用CFSE施用后，对小鼠脚PAD进行了施用后，我们成功地在区域淋巴结中成功地执行了树突状细胞的实时图像，并成功地分析了淋巴结淋巴结和分析的淋巴结和分析的淋巴结中的皮肤树突状细胞的转移。此外，在麻醉下成功地对小鼠进行了活皮肤成像，并建立了一个系统，以阐明皮肤免疫反应过程中树突状细胞的空间和时间动力学，同时还活着。