放射線による腸死に対する治療法としての幹細胞移植の可能性の探索

探索干细胞移植治疗辐射引起的肠道死亡的潜力

基本信息

批准号：
21659282
负责人：
小野哲也
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659282/
关键词：
放射線腸死小腸幹細胞移植マウス

项目摘要

放射線による腸死に対し幹細胞移植による治療の可能性を探るためマウスを用いたモデル実験を行うのが目的である。昨年の結果から胎仔期の小腸上皮細胞を用いれば幹細胞移植がより効率的に行える可能性が示唆されたので、本年度はまず小腸上皮細胞をsingle cellとしてより多く回収する方法を検討した。具体的には細胞が緑の蛍光を発するように改変されたEGFPマウスの17.5～18.5日齢胎仔小腸を用い、文献情報から得られたコラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、パンクレアチン、トリプシン、DNase I、EDTAの単独及びそれらの2つ以上の組み合わせた処理について検討した。また処理方法は0℃×60分、20℃×20分、37℃×20分についてチェックした。指標としてはsingle cell suspensionが得られるか、蛍光蛋白が細胞内によく保持されているか、細胞の収率はよいかの3点で行った。その結果、EDTA存在下でヒアルロニダーゼを37℃×20分処理後トリプシン+DNase Iを20℃×20分を行うのが最適であることが分かった。この時の細胞の回収率は0.3～1×10^5 cells/マウスであった。次にこの細胞を用い10Gy照射したマウスの尾静脈に投与した結果、マウスの生存期間は9～11日であった。これは何も処理しない時の生存期間とほぼ同じであり、生存率への影響はみられなかった。このとき小腸にはかなりの数の移植された蛍光細胞がみられたが、幹細胞から絨毛上皮に向けた直線状の細胞のつながりは見えなかったので、幹細胞をうまく移植できたかどうかは不明である。個体の腸死を回復させるためには今後さらなる検討が必要である。

目的是使用小鼠进行模型实验，以探索用辐射引起的肠道死亡的干细胞移植治疗的可能性。去年的结果表明，使用胎儿小肠上皮细胞，干细胞移植可能更有效，因此今年我们首先考虑了一种作为单个细胞收集更多小肠上皮细胞的方法。具体而言，我们使用了经过修饰以发出绿色荧光的EGFP小鼠的17.5-18.5天大的胎儿肠，以检查胶原酶，透明质酸酶，胰腺素，胰蛋白酶，DNase I，EDTA，单独的EDTA以及其中两种或更多的处理。还检查了处理方法0°C x 60分钟，20°C x 20分钟和37°C x 20分钟。指标是在三个点上进行的：是否获得了单个细胞悬浮液，是否在细胞中很好地保留了荧光蛋白，以及细胞产量是否好。结果，发现最好在EDTA存在37°C的情况下治疗透明质酸酶20分钟，然后胰蛋白酶 + DNase I 20°C 20°C 20分钟。目前，细胞回收率在0.3-1×10^5细胞/小鼠之间。接下来，将这些细胞用于用10 Gy照射的小鼠的尾静脉，小鼠的存活周期为9-11天。这与未进行治疗的生存时间大致相同，并且未观察到对生存的影响。目前，在小肠中看到了相当数量的移植荧光细胞，但是细胞从干细胞与绒毛上皮的线性连接不可见，因此尚不清楚干细胞是否成功移植。将来需要进一步考虑以恢复个体的肠道死亡。