難聴遺伝子変異マウスへのiPS細胞移植による難聴レスキュウー

将iPS细胞移植到耳聋基因突变小鼠中挽救听力损失

• 批准号: 21659394
• 负责人: 池田 勝久
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659394/
• 关键词: 遺伝性難聴; ips細胞; GJB2; 内耳; マウス; iPS細胞; コンブィショナルKOマウス; コネキシン26

本研究では難聴遺伝子変異マウス内耳へのiPS細胞の効果的な細胞導入法を開発するため以下の成果が得ている。1.遺伝子変異マウスの作製:我々は細胞移植治療の対象とする遺伝性難聴モデルマウスとして、ヒト遺伝性難聴において世界で最も高頻度に変異が検出されるConnexin26(Cx26)のコンディショナルノックアウトを新規に作成した。まず新規に作成したCx26遺伝子のfloxedマウスにP0プロモーターの制御下で内耳を含む神経系全域でCre遺伝子を発現するトランスジェニックマウスであるP0-Creマウスを交配し、floxed Cx26アレルがホモ接合体であり、Cre遺伝子が陽性となる個体(Cx26コンディショナルKO)を選抜し、同腹仔とともに移植実験に供した。2.経半規管細胞移植法の検討:まず既に移植効果の確認されている骨髄間葉系幹細胞(MSC)により検討した。半規管に小孔をあけ、2×10^5cellsを還流し、小孔の修復のためにMSCの無接着培養により作成した細胞塊(cell sphere)を小孔部に挿入することにより術後のリンパ液の漏出を抑えた。挿入された移植細胞塊は術後2週間においても半規管組織内において維持、さらには進展していることが確認されている。3.移植細胞の検出:経半規管移植後の組織を抗GFP抗体での免疫蛍光染色により移植細胞の組織進入を解析したところ、前庭線維細胞組織内、蝸牛ラセン板縁組織内に移植細胞の生着を確認した。移植後の聴力を術後8週間までモニタリングしたが、手術による聴力低下は正常動物でも難聴モデルにおいても見られなかった。4.iPS細胞の調整:マウスiPS細胞は理研バイオリソースセンターからの供与を受けSNLフィーダー細胞存在下で培養を行っている。内耳前駆細胞への分化を即し前述の方法で難聴モデル動物へ導入する予定である。

In this study, the following results were obtained from the development of a cell introduction method for iPS cells in the inner ear. 1. The mechanism of genetic diversity: We have developed new regulations for the treatment of cell transplantation with the highest frequency of genetic diversity in the world, including Connexin26(Cx26). The new regulation was made for the floxed Cx26 gene, P0-Cre gene, Cx gene, Cre gene, Cx gene, 2. Study of semicircular canal cell transplantation method: identification of transplantation results and study of mesenchymal stem cells (MSC). 2× 10^5 cells in the semicircular canal are returned to normal, the repair of the pores is performed, and the MSC is cultured in a non-continuous manner to form a cell sphere. 2 weeks after transplantation, the transplanted cell mass was maintained in the semicircular canal tissue, and the progress was confirmed. 3. Detection of transplanted cells: Immunofluorescence staining of tissues after semicircular canal transplantation with anti-GFP antibodies, analysis of tissue entry of transplanted cells, identification of the existence of transplanted cells in vestibular vascular cells, snail tissues, etc. After transplantation, 8 weeks after transplantation, the strength was reduced, and the normal animals were difficult to see. 4. Adjustment of iPS cells: iPS cells are cultured in the presence of SNL cells. The differentiation of anterior ear cells is difficult to determine by the method described above.

项目成果

Development of distortion product otoacoustic emissions in C57BL/6J mice

• DOI: 10.1080/14992020902858959
• 发表时间: 2009-01-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF AUDIOLOGY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Narui, Yuya;Minekawa, Akira;Ikeda, Katsuhisa
• 通讯作者: Ikeda, Katsuhisa

Cochlear Gap-Junction plaque is disrupted by dominant-negative Connexin26 mutation

显性失活 Connexin26 突变破坏了耳蜗间隙连接斑块

• 发表时间: 2010
• 作者: Ouji Y;Yoshikawa M;Ishizaka S.;Katsuhisa IKEDA;Katsuhisa IKEDA;K Ikeda
• 通讯作者: K Ikeda

Transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells into neonatal, adult and aged mouse cochlea

将骨髓间充质干细胞移植到新生、成年和老年小鼠耳蜗中

• 发表时间: 2010
• 作者: Ouji Y;Yoshikawa M;Ishizaka S.;Katsuhisa IKEDA;Katsuhisa IKEDA;K Ikeda;Katsuhisa IKEDA
• 通讯作者: Katsuhisa IKEDA

COCHLEAR OUTER HAIR CELLS IN A DOMINANT-NEGATIVE CONNEXIN26 MUTANT MOUSE PRESERVE NON-LINEAR CAPACITANCE IN SPITE OF IMPAIRED DISTORTION PRODUCT OTOACOUSTIC EMISSION

• DOI: 10.1016/j.neuroscience.2009.08.043
• 发表时间: 2009-12-15
• 期刊: NEUROSCIENCE
• 影响因子: 3.3
• 作者: Minekawa, A.;Abe, T.;Ikeda, K.
• 通讯作者: Ikeda, K.

Relationship between olfactory acuity and peak expiratory flow during postoperative follow-up in chronic rhinosinusitis associated with asthma

慢性鼻-鼻窦炎哮喘患者术后随访中嗅觉敏锐度与呼气峰流量的关系

• 发表时间: 2010
• 期刊: Ann Otol Rhinol Laryngol 119(11)
• 作者: Ikeda K;Yokoi H;Kusunoki T;Saitoh T;Yao T;Kase K;Minekawa A;Inoshita A;Kawano K
• 通讯作者: Kawano K