权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Gjb2のコンディショナル・ノックアウト・マウスの遺伝子導入による難聴レスキュー

Gjb2条件性敲除小鼠基因转移挽救听力损失

基本信息

批准号：
15659402
负责人：
池田勝久
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659402/
关键词：
GJB2遺伝子先天性難聴聴性脳幹反応動物モデルコルチ器

项目摘要

先天性難聴の原因として、GJB2遺伝子変異が重要であることはよく知られている。ヒトでの解析には限界があるので、動物モデルでの解析が検討されている。Cre recombinase存在下でgjb2遺伝子翻訳領域が切り取られるようなコンストラクトを作成し、ES細胞に相同組換えにより導入した。ネオマイシンによる選別を行いサザンブロット法により組替え体を同定した。ES細胞をB6マウスの胚盤胞へ注入してキメラマウスを作製した。続いてB6マウスと戻し交配を行いF1マウスを得た。Cre recombinaseを持つトランスジェニックマウスと交配させ、遺伝子欠失マウスを同定し解析に供した。聴性脳幹反応で聴力閾値を測定し、内耳を採取、パラフィンまたはエポンに包埋した。パラフィンに包埋したサンプルをヘマトキシリン・エオジン(H & E)染色、免疫組織染色で解析した。(Gjb2欠失マウスでは最大100dBのクリック音刺激でも脳幹反応を得ることができなかった。一方、野生型ではI-V波の明瞭な聴性脳幹反応を認め、閾値は30dB以下であった。欠失マウスではspiral limbusの線維細胞の減少が認められた。またコルチ器の構造がやや虚脱している所見が得られ、優性的阻害効果のあるgjb2変異マウスに類似した。血管条、ラセン靱帯の線維細胞、ラセン神経節細胞、ライスネル膜、蓋膜などは両者に明らかな違いは認めなかった。聴性脳幹反応による聴力検査では変異体では極めて高度な難聴像を示した。今回作製したマウスはヒトのGJB2の異常による言語習得前の高度難聴と極めて類似した表現型を示すことが判明し、ヒト(GJB2遺伝子変異による難聴のマウスモデルとなることが示唆された。

The reasons for congenital difficulties and differences in GJB2 inheritance are important. The analysis of animals and animals is limited to the analysis of animals. In the presence of Cre recombinase, gjb2 gene translation domain is cut off, ES cells are transformed and introduced. The selection process is the same as the selection process. ES cells are injected into the blastoderm cells. B6 is the best choice. Cre recombinase can be used to determine the identity of the species. The inner ear is used to measure the strength threshold of the stem. The results of H & E staining and immunohistochemical staining were analyzed. (Gjb2 100dB maximum noise level On the one hand, the wild type has a clear understanding of the I-V wave and a positive response, and the threshold value is below 30dB. The loss of spiral-limbus cells is recognized. The structure of the device is similar to that of the structure of the device. Vascular strips, vascular cells, nerve ganglion cells, vascular membranes, mantle membranes, etc. It is difficult to find out the difference between the two. This is the first time that we've had a problem with speech acquisition.