Struktur und Funktion eukaryontischer N-Methylpeptidsynthetasen: Molekulare Charakterisierung katalytischer Zentren des Multienzyms Enniatin-Synthetase und verwandter Systeme
Struktur und Funktion eukaryontischer N-Methylpeptidsynthetasen: Molekulare Charakterisierung katalytischer Zentren des Multienzyms Enniatin-Synthetase und verwandter Systeme
批准号:
5392659
负责人:
Privatdozent Dr. Rainer Zocher
金额:
$0.0万
依托单位国家:
德国
项目类别:
Research Grants
财政年份:
1997
资助国家:
德国
项目状态:
已结题
起止时间:
1996-12-31 至 2002-12-31
中文摘要
在索伦干酪链霉菌(Streptomyces Sollen Abgeschlossen)中进行了多酶的表达。从结构功能分析和环肽分析两个方面进行了研究。Auüerdem Sollen verschiedene Deletions svaranten,z.B.在空间区域zwitchen den Aktivierungsdonänen exmiert,以及Deletionen Deletionen auf def die Enzymaktität untersuthden的甲基化酶。更重要的是,这是一种新的生活方式,它是一种特殊的生活方式。为解决这些问题,我们进行了大量的实验。在此期间,我们不再需要时间,也不需要再做任何事情了。在分析超速离心机的过程中,发现了低聚物(三聚体)所含的天然酶和单体。
英文摘要
Die Arbeiten an der Expression der gesamten, katalytisch aktiven Enniatin Synthetase (ESYN) sowie von Fragmenten des Multienzyms in Streptomyces sollen abgeschlossen werden. Sie bilden die Grundlage für die Herstellung neuer Hybridsynthetasen sowie Varianten der ESYN, die zur Struktur-Funktionsanalyse und zur Herstellung neuer Cyclopeptide verwendet werden. Außerdem sollen verschiedene Deletionsvarianten, z.B. in der Methylase bzw. der Spacerregion zwischen den Aktivierungsdomänen exprimiert, und der Einfluß der Deletionen auf die Enzymaktität untersucht werden. Weiter ist geplant, die AdoHcy-Bindungsstelle zu lokalisieren und entsprechende Mutationen in diesem Bereich zu erzeugen. Die Kristallisationsexperimente zur Ermittlung der Raumstruktur der ESYN sollen fortgesetzt werden. Diese Untersuchungen werden ergänzt durch elektronenmikroskopische Studien, bei denen Komplexe mit monoklonalen Antikörpern weitere Erkenntnisse über die Anordnung der Reaktionszentren ergeben sollen. Das Molgewicht der nativen ESYN soll durch analytische Ultrazentrifugation ermittelt werden um festzustellen, ob das native Enzym als Monomer oder Oligomer (Trimer) vorliegt.
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