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O-結合型糖鎖コア1合成酵素欠損マウスの表現型解析と機能的糖タンパク質の同定

O-连接聚糖核心1合酶缺陷小鼠的表型分析和功能糖蛋白的鉴定

基本信息

批准号：
22500383
负责人：
工藤崇
金额：
$ 2万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

O-結合型糖鎖の一つであるムチン型糖鎖の生体における機能解明のために、ムチン型糖鎖のコア1構造を合成するコア1構造合成酵素遺伝子(C1galt)のコンディショナルノックアウトマウス(CKO)を作製した。コンベンショナルなC1galtノックアウトマウスは、胎生中期に血管形成異常により死亡してしまうため、様々な組織特異的なプロモーターにより発現制御されるCreリコンビナーゼ発現マウスと交配して、コンディショナルノックアウトマウスを作製した。polyI-polyCを腹腔内投与することによる優先的に骨髄細胞で作用する誘導型のコンディショナルノックアウトマウス、C1galt1^<flox/->/Mx1-Creを使用することにより血液細胞におけるムチン型糖鎖の役割を検証した。polyI-polyC投与後CKOでは徐々に末梢血中の血小板数が低下し、最終的に野生型(WT)の約1割まで低下した。末梢血のスメア標本をギムザ染色したところ、CKOマウスの巨大血小板が観察された。血小板減少により止血機構の異常が予想されたので、Tail bleeding time解析による出血時間の測定を行ったところ、CKOマウスでは、ほとんどのマウスで10分間以上出血し続けた。骨髄および脾臓における巨核球数を組織化学的解析により計測したことを、いずれも細胞数に違いはなかった。巨核球の分化状態をDNAploidy解析によって検証したが差は見られなかったことと免疫組織学的解析により巨核球分化の指標の一つであるvWFの発現に差が見られなかったことにより、CKOの巨核球の核の多倍数化を生じる細胞分化は正常であることが判明した。マウスの骨髄より巨核球を分離して、in vitroで培養すると血小板放出の最終段階と考えられている巨核球胞体突起形成(Proplatelet forrmation)は、CKOではほとんど見られなかった。

The biological function of O-linked glycochains is clarified, and the structure of O-linked glycochains is synthesized. The synthesis of enzyme (CKO) is carried out. C1galt can be used to control the development of abnormal angiogenesis in mid-fetal life, death, and tissue-specific angiogenesis. PolyI-polyC is administered intraperitoneally and preferentially to bone marrow cells, and is used to induce the formation of an inducible type of carbohydrate, C1galt1^<flox/->/Mx1-Cre. After polyI-polyC administration, the platelet count in peripheral blood decreased gradually, and the final wild-type (WT) decreased by about 1 cut. The peripheral blood was stained with red and blue, and the CKO was stained with red and blue. Thrombocytopenia, abnormal bleeding mechanism, determination of bleeding time, CKO, bleeding time The number of megakaryocytes in the bone marrow and spleen was measured by histochemical analysis, and the number of cells in the liver was also determined. The differentiation status of megakaryocytes was detected by DNA ploidy analysis, and the differentiation of CKO megakaryocytes was detected by immunohistochemical analysis. Megakaryocyte separation, in vitro culture, final stage of platelet release, prokaryote formation, CKO.