RNA Interferenz-Untersuchungen zur Entstehung von B-, T- und myeloischen Vorläuferzellen im Knochenmark

Hintergrund：Während bereits‘s liche Schritte in der Entwickung von B-，T-und muloischen Vorläuferzellen augegehend von CD34+hämatopotischen Progenitorzellen(HSC)untersuht ht Wurden，ist Bisher unverstanden，Wie sich im Knochenmark die Bstimmung von HSC entscheidet.他说：“我不知道你的意思是什么？”他说，“我不知道该怎么做，但我不知道。”他说：“这是一件很重要的事情，我不知道该怎么做。B和T Zell Sowie Sowie脊髓病Vorläufern kann Daher zum Verständnis der Entsteung淋巴组织和脊髓病患者Leukämien beitragen。方法：MIT Hilfe der Sage(基因表达系列分析；Velculesu等，1995)方法Wurden bereits Genomweite Genomweite Genemages Profile zu Normal en and恶性淋巴组织与骨髓Zellen Zellen des Knochenmark Generiert and Untereinander verglichen。Aus diesen Vergleichen Wurden Kandidatengene für die Norman and leukämische Entwickrun Lymhoider and M eloischer Zellen des Knochenmark ID fiziert.采用定量RT-PCR、FACS等方法对差异表达基因进行验证。在Zellkulberingungen zu的帮助下，我们进行了基因工程，Kandidatengene和Pit Phänotyischen Knoackout实验(RNAi；Elbashir et al.，2001)。Kandidatengene für die leukämische变换淋巴组织在Anbindung an Treaturiestudien zu B-all-and AML klinisch valdiert的骨髓病患者Vorläuferzellen Sollen MIT Hilfe Selfe通用微阵列中被证实。Vorarbeiten：CD34+造血干细胞、同种异体淋巴细胞前体细胞(CPL)、Prä-B Zellen、Prä-T Zellen和髓系细胞Progenitorzellen Wurden Aus Knochenmarkproen Gesundern aufgereinigt。Von Diesen Popolationen-MIT Ausnahme von CLP-Wurden bereits Genomweite，定量sage-Geners Profile Generiert，die zur Zeit untereinander and MIT Leukämien verglichen.Dazu Wurden失去了其圣人形象für Leukämiezellen von Jeweils zwei Fällen MIT BCR-ABL1+und MLL-AF4+B-ALL通用。在Eer ersten分析Wurden Differell Exprierte基因鉴定中，可能会发现Festlegung auf die B Zell Differenzierungsreihe im Knochenmark Beteiligt Sind(Müschen等人，2002)。我的意思是：Bisher unbekannte基因，死于正常男性和恶性肿瘤，是一种新的疾病，也是一种特殊的疾病。我是Vorhaben im Vordergrund的后代：-分析和重新编程DES Transkrigtoms während der Festleung von Progenitorzellen auf die B，T der der m eloische血统。-Genomweite Suche nach Kandidatengenen der Leukämischen Transform von B，T and Medoischen Vorläuferzellen.-KLonierung der vollständigen kodierenden Sequenz Neuer Kandidaten-gene and Deren Funktionelle Charakterisierung MIT RNA Interferenz.-Validierung Neuer Kandidatengene für die Entsteung von akuten淋巴母细胞瘤和骨髓基质Leukämien im klinischen Kontext MIT Hilfe Selbst Generierter微阵列。

Hintergrund: Während bereits wesentliche Schritte in der Entwicklung von B-, T- und myeloischen Vorläuferzellen ausgehend von CD34+ hämatopoetischen Progenitorzellen (HSC) untersucht wurden, ist bisher unverstanden, wie sich im Knochenmark die Bestimmung von HSC entscheidet. Eine genomweite Suche nach Schlüsselereignissen, die die Entwicklung innerhalb der B-, T- oder myeloischen Linie determinieren, steht bisher aus. Während dieser Festlegung können typischerweise Leukämien entstehen, die vielfach in ihrer Zugehörigkeit zu einer dieser Linien nicht klar determiniert sind. Die Untersuchung des Ursprungs von B und T Zell sowie myeloischen Vorläufern kann daher zum Verständnis der Entstehung lymphoider und myeloischer Leukämien beitragen. Methoden: Mit Hilfe der SAGE (serial analysis of gene expression; Velculesu et al., 1995) Methode wurden bereits genomweite Genexpressionsprofile zu normalen und malignen lymphoiden und myeloischen Zellen des Knochenmarks generiert und untereinander verglichen. Aus diesen Vergleichen wurden Kandidatengene für die normale und leukämische Entwicklung lymhoider und myeloischer Zellen des Knochenmarks identifiziert. Die differentielle Expression dieser Gene soll mit alternativen Methoden (quantitative RT-PCR, FACS) verifiziert werden. Es ist geplant, die funktionelle Rolle dieser Kandidatengene mit phänotypischen Knockout Experimenten mit Hilfe von RNA Interferenz (RNAi; Elbashir et al., 2001) unter Zellkulturbedingungen zu untersuchen. Kandidatengene für die leukämische Transformation lymphoider oder myeloischer Vorläuferzellen sollen mit Hilfe selbst generierter Microarrays in Anbindung an Therapiestudien zu B-ALL- und AML klinisch validiert werden. Vorarbeiten: CD34+ HSC, gemeinsame lymphoide Progenitorzellen (CPL), prä-B Zellen, prä-T Zellen und myeloide Progenitorzellen wurden aus Knochenmarkproben gesunder Donoren aufgereinigt. Von diesen Populationen- mit Ausnahme von CLP- wurden bereits genomweite, quantitative SAGE-Genexpressionsprofile generiert, die zur Zeit untereinander und mit lymphoiden und myeloischen Leukämien verglichen werden. Dazu wurden bereits SAGE-Profile für Leukämiezellen von jeweils zwei Fällen mit BCR-ABL1+ und MLL-AF4+ B-ALLs generiert. In einer ersten Analyse wurden differentiell exprimierte Gene identifiziert, die potentiell an der Festlegung auf die B Zell Differenzierungsreihe im Knochenmark beteiligt sind (Müschen et al., 2002). Ziele: Bisher unbekannte Gene, die die normale und maligne Entwicklung von lymphoiden und myeloischen Vorläuferzellen beeinflussen können, sollen in einer genomweiten Suche identifiziert und in ihrer Wirkungsweise charakterisiert werden. Im einzelnen steht die Bearbeitung der folgenden Vorhaben im Vordergrund: - Analyse der Reprogrammierung des Transkriptoms während der Festlegung von Progenitorzellen auf die B, T oder myeloische Lineage. - Genomweite Suche nach Kandidatengenen der leukämischen Transformation von B, T und myeloischen Vorläuferzellen. - Klonierung der vollständigen kodierenden Sequenz neuer Kandidaten-Gene und deren funktionelle Charakterisierung mit RNA Interferenz. - Validierung neuer Kandidatengene für die Entstehung von akuten lymphoblastischen oder myeloischen Leukämien im klinischen Kontext mit Hilfe selbst generierter Microarrays.