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抗アポトーシス作用を持つ新規心筋転写因子の機能解析

一种新型抗凋亡心肌转录因子的功能分析

基本信息

批准号：
22659159
负责人：
福田恵一
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

抗アポトーシス作用を持つ新規心筋転写因子として、Zac-1遺伝子を同定した。Zac-1をCOS細胞に遺伝子導入し、抗体で染色した結果、および核分画と細胞質分画を分離し、Western blotを行った結果、この遺伝子は主として核分画に存在することが明らかになった。胎生7.5日以後のマウス胎児をwhole mount in situ hybridizationを行い、心臓領域のZac-1遺伝子の発現を観察したところ、Zac-1は胎生7.75日より発現し、胎生8日より強く発現することが明らかとなった。Zac-1遺伝子はANPプロモーターに対する転写促進活性を有していた。この転写因子がANPプロモーターのいずれの部位に結合するかを明らかにするため、ANP-Lucプラスミドのdeletion mutantを作成し、Zac-1遺伝子の結合部位を同定したところ、Zac-1は2カ所あるNkx2.5遺伝子結合部位の2個目の直前に存在することが推測された。種々の長さのZac-1の変位位体を作成し、変位体プラスミドとANP-LucプラスミドをともにCOS細胞に共遺伝子導入し、ルシフェラーゼアッセイを行ったところ、Zac-1遺伝子のいずれの部分がANPプロモーターと結合することが明らかとなった。COS細胞のNkx2.5、GATA4、MEF2Cのいずれかの遺伝子とZac-1変位体を共発現させ、共免疫沈降により、会合を確認した。既知の心臓特異的転写因子とZac-1遺伝子のANPプロモーターに対する作用を観察し、Zac-1遺伝子の心臓における転写因子としての性質を解析したところ、Zac-1とNkx2.5遺伝子は共調的に働き、ANPの転写活性を増強させた。

The anti-corruption function of Zac-1 gene is determined by the new core factor. Zac-1 gene transfer into COS cells, antibody staining, nuclear analysis, cytoplasmic analysis, Western blot analysis, gene transfer, nuclear analysis, presence of DNA. After 7.5 days of birth, the whole mount in situ hybridization was carried out. The development of Zac-1 gene in the heart region was observed. Zac-1 gene was detected at 7.75 days of birth. The development of Zac-1 gene was strong at 8 days of birth. The Zac-1 gene has the ability to promote the activity of ANP. The expression factors of ANP and ANP-Luc are determined by the binding sites of Zac-1 and Nkx2.5 respectively, and the two binding sites of Zac-1 and Nkx2.5 are predicted. Zac-1 gene expression vector was constructed, and the vector was transferred to COS cells. Zac-1 gene expression vector was partially incorporated into ANP gene expression vector. COS cells Nkx2.5, GATA4, MEF2C were identified by co-expression, co-immunoprecipitation, and co-fusion. We have investigated the effect of known cardiac specific transcription factors on ANP expression in Zac-1 gene, analyzed the properties of cardiac transcription factors in Zac-1 gene, and enhanced the transcription activity of ANP in Zac-1 gene.